猪链球菌种与9型猪链球菌二重PCR检测方法建立应用.pdfVIP

ANIMAL ACADEMICSYMPoSIUMOFTHEFOURTHBRANCHASSOCIATIONOFSMALL MEDIClNE SIXTEENTH8RANCHASSOCIATIONOFVETERINARYSURGERY．CAAV 中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会中国畜牧兽医学会鲁医外科学分客第十六次学术 猪链球菌种与9型猪链球菌二重 PCR检测方法的建立及应用+ 刘梅芬+ 吴志明一 闰若潜1 盛 敏1 赵明军1 拜廷阳2 (I 河南省动物疫病预防控制中心，河南郑州450008 2周17市动物疫病预防控制中心，河南周17 466000) ssuis，ss)种与9型猪链球菌(ss9)的快速诊断 摘要：为了建立猪链球茵(Streptoeoecu 物，以标准SS9株基因组DNA为模板，建立了SS种和Ss9的二重PCR检测方法，并进行了 特异性、敏感性和重复性试验；利用所建立的检测方法对临床34例疑似猪链球茵感染猪临床 样品进行了应用检测，并与常规细菌分离鉴定方法进行了比对。结果表明成功建立SS种和 SS9型猪链球菌二重PCR检测方法，该方法的检测灵敏度可达100个CFU，特异性和重复性 好；利用该方法对34份临床分离自疑似猪链球茵感染样品的细菌培养物进行了应用检测试验， 其中有11份样品为gdh阳性，11份gdh阳性样品中有3份样品同时为SS9阳性。本研究成功 建立了SS种与SS9型猪链球菌二重PCR检测方法，可用于猪链球茵种和Ss9型猪链球菌的快 速诊断。 关键词：猪链球茵种；9血清型；二重PCR；检测；建立；应用 猪链球菌(Streptocoecussuis，SS)是一种重要的人兽共患病原菌，可引起猪的多种疾病，侵害各 年龄阶段的猪只，通常以败血症、脑膜炎、关节炎、淋巴结炎为主要特征…，还可引起人类感染胸膜 炎、败血症等，导致严重疾患，甚至死亡【2】。根据猪链球菌的荚膜多糖抗原(cps)可将其分为35个血 和9型(SS9)∞J。近年来这些高致病性血清型株的流行呈现上升趋势并造成了巨大的经济损失，并且 可引起人的感染和死亡u一-。 建立猪链球菌的快速诊断和血清型分型方法对该病的早期临床诊断、防治、疫苗防疫及公共卫生等 具有重要的实际意义。用传统的微生物学病原分离技术结合血清学反应试验能够对猪链球菌进行诊断和 血清学分型，但该方法费时费力，而且敏感性不高，易产生非特异性结果。因此建立猪链球菌快速、敏 感、特异的诊断及血清型分型方法对猪链球菌病的防控非常必要。目前，对2型猪链球菌快速诊断、血 清型分型方法等已有较多的研究”】，但利用PCR对SS9的快速诊断及血清型分型等的研究还相对较少。 tamate 因，可作为检测猪链球菌种的重要标志性基因。利用gdh基因设计引物建立的PCR诊断方法可对所有 猪链球菌种进行快速鉴定¨，。 · ·基金项目：河南省科技攻关项目(0624410098) 作者：吴志明，E—Inlltil．_wuzhm@vip．sina．com 315 ASSOClATIONOFSMALLANIMALMEDlCINE＆THE YSURGERY．CAAV 中国畜牧善医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会 床样品的应用扩增进行了试验。 1材料与方法 1．1材 料 1．1．1 菌 株 SS7、SS9标准株，由中国动物卫生与流行病学中心惠赠；葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、 大肠杆菌、猪附红细胞体及弓形虫由河南省动物疫病预防控制中心实验室保存；34株疑似链球菌样品： 由河南省动物疫病预防控制中心实验室分离