儿童骨髓间充质干细胞体外培养与富集效率的研究.pdfVIP

第 23卷第21期2008年 l1月 JApplClinPediatr。VoL23No．21。Nov．2008 · 1686 · · 宾 验研 究 · · 论 著 · 儿童骨髓间充质干细胞体外培养与富集效率的研究 周 莉，张兰芳，陆 勤，方拥军，杨 引，贲晓明 (南京医科大学附属南京市儿童医院血液科 ，南京210008) 摘要：目的 比较密度梯度离心法和全骨髓培养法分离培养儿童骨髓间充质干细胞 (BMSCs)获得的细胞纯度与克隆形成效 率。方法 取等量抗凝的儿童骨髓分别以密度梯度离心法和全骨髓培养法分离培养BMSCs，传代至第3代分别计数2种方法所得 BMSCs的细胞总数，流式细胞仪检测表面标记物及其纯度，对第5代BMSCs分别绘制生长曲线，全骨髓培养法培养至第6代流式细 胞仪再检测表面标记物及其纯度。结果 2种方法均能有效培养出BMSCs，BMSCs强表达 CD 及CD 低表达 CD ；3mL骨髓样 本用全骨髓培养法扩增至第3代平均可获得3．15x10个细胞，而密度梯度离心法3mL骨髓只获得1．08×10个细胞 ，二者有显著 性差异(P0．05)；密度梯度离心法第3代BMSCs纯度达95％以上，全骨髓培养法第3代BMSCs纯度约85％，多次换液传至第6 代纯度可达到95％以上；2种方法第5代BMSCs生长曲线近似，接种后0～3d为生长潜伏期，3～6d为对数生长期，之后进入平台 期，无显著性差异(P0．05)。结论 密度梯度离心法分离培养 BMSCs，可在短时间内获取纯度较高的BMSCs；全骨髓培养法分离 培养 BMSCs，可从少量标本获得最大数量的BMSCs，多次换液传代也可获得纯度较高的BMscs。 实用儿科临床杂志 。2008。23l21)：1686—1688 关键词：骨髓间充质干细胞 ；分离；培养；儿童 中图分类号：R725．5 文献标志码：A 文章编号：1003—515X(2008)21—1686—03 StudyonCultivationinvitroandEnrichingEfficiencyofBoneMarrow MesenchymalStem CellsinChildren ZHOULi，ZHANGLan一 ng，LUQin，FANGy0凡g一 n，YANGYin，BENXiao一 几g (DepartmentofHematology，NanjingChildrensHospitalofNamingMedicalUniversity，Naming210008，JiangsuProvince，China) Abstract：Objective Todeterminethedifferencebetweendensity—gradientcentrifugationandfull—bone—marrowculturemethodfor theisolationandcultivationofbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)，andprovidebasisofrselectingthebestmethodofrdifferentexpe— rimentalpurpose．M ethods Bonemarrow aspiratewereharvestedandculturedwith density—gradienteentrifugationandfull—bone—marrow cultureme山odrespectively．thethirdpassagecellsfrom2methodswereusedtodetectthespecificsurfacemarkerswi山Flowcytometryand山e t0talnumberofallcellswerecalculated；thefifthpassagecellswereculturedofranotherdaystodraw 山ergowthcurve．Thesixthpassageceils fromfull—bone—marrow culturemethodweredetectedthesurfacemrak