表皮葡萄球菌phou同源物（serp0316）de抗体制备及免疫鉴定【精选】.pdfVIP

． 174． 生 壁 垒竺堡 Infections,September25,2014,9(3)．．174-181 http：／／jmi,fudan,edu．cn · 论 著 · 表皮葡萄球菌PhoU同源物 (SERP0316)的抗体制备及 免疫鉴定 韩海燕，王小飞，武有聪，许涛，刘华勇，蔡霞，瞿涤 复旦大学基础医学院教育部 ／卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海 200032 摘 要：表皮葡萄球菌可在植入性医疗材料表面形成生物膜，对多种抗生素耐受 ，而持留菌的形成是导致细 菌生物膜耐药的原因之一。研究发现，大肠埃希菌中PhoU可影响持留菌的形成，与细菌对多种抗生素及压 力条件的耐受相关 ，但表皮葡萄球菌中PhoU的功能仍不清楚。生物信息学分析显示，在表皮葡萄球菌中存 在2个phoU同源基因，其中serp0956位于pst操纵子中，命名为phoU1；另一个编码功能未知蛋白的phoU 基因同源物(serp0316)命名为phoU2。前期研究显示，敲除 phoU1并不影响表皮葡萄球菌生长、生物膜形成 等生物学特性，为此本研究对PhoU2进行了初步探讨。利用实时荧光定量反转录．聚合酶链反应 (RT—PCR) 检测phoU2基因在表皮葡萄球菌 SE1457不同生长时期的转录水平 ，发现其在细菌生长不同时间点持续表 达，其中对数期(6h)表达量相对较高。为进一步研究表皮葡萄球菌中PhoU2的表达情况，对PhoU2蛋白进 行原核表达和纯化，并用纯化的重组PhoU2蛋白免疫小 鼠制备 PhoU2多克隆抗体。在此基础上，利用蛋白 免疫印迹法检测PhoU2在 SE1457菌株不同生长时间点的表达水平，结果显示 PhoU2在细菌生长对数期和 平台期均有表达。另外，在不同的表皮葡萄球菌临床分离株中均检测到PhoU2蛋白表达，表明PhoU2具有 一 定的保守性。以上研究提示，PhoU2可能作为PhoU的功能同源物发挥一定的作用 ，为进一步研究表皮葡 萄球菌PhoU2的生物学功能及其在生物膜和持留菌形成中的作用奠定了基础。 关键词：表皮葡萄球菌；phoU同源基因；原核表达；持留菌 ExpressionofaPhoU homologue (SERP0316)inS p ZDcocc epidermidis HAN Hai-Yan，WANG Xiao-Fei，WU You-Cong，XU Tao，LIU Hua—Yong，CAIXia， QU Di KeyLaboratoryofMedicalMolecularVirologyofMinistriesofEducationandHealth，SchoolofBasicMedical Sciences，FudanUniversity，Shanghai200032，China Abstract：The pathogenesisofStaphylococcusepidermidis (S． epidermidis) in persistentinfections is primarilyattributed to its ability to form biofilmson the surface of indwelling medicaldevices ． The antibiotictoleranceofbiofilm iSpartly dueto thepresenceofpersistercells；however，themechanism of bacterialpersistenceispoorlyunderstood．InEscherichiacoli(E．coli)，PhoU wasreportedasapersistence switchinvolvedinpersisterformationandtolerancetomultipleantibioticsandstresses．TherearetwophoU homologues(serp0956andserp0316)inS．epidermidis．Asacomponentofpstoperon，serp0956was designatedphoU1．TheotherphoU homologueserp0316which encodedahypoth