猪A群轮状病毒VP6的表达及IgG抗体ELISA检测方法的建立与初步应用.pdfVIP

动物医学进展 ，2014，35(7)：1-6 ProgressinVeterinaryM edicine 猪 A群轮状病毒 VP6的表达及 IgG抗体 ELISA检测方法的建立与初步应用 陈淑华 。，库旭钢 ，闫贵伟 ，丁振江 ，何启盖 (1．农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉 430070；2．华 中农业大学动物医学院，湖北武汉 430070) 摘 要：为建立猪A群轮状病毒抗体间接 ELISA检测方法，用于开展对该病毒感染的流行病学调查和 免疫抗体评估 ，进行 了猪 A群轮状病毒 TM—a株 内衣壳VP6基 因的表达 ，用 SDS—PAGE和Westernblot鉴 定分析。 目的蛋 白得到表达，大小约 7Oku，Westernblot表 明，该蛋 白与猪 A群轮状病毒阳性血清反应。 用该蛋 白作为包被抗原，通过对条件优化 ，包被抗原浓度为2 g／mL，待检血清稀释倍数为 1：40倍，标记抗 体的稀释倍数为 1：4000倍，建立了检测猪轮状病毒血清 IgG抗体的间接 ELISA方法。用该方法检测临 床样品 142份，并与间接免疫 荧光试验 (IFA)对 比，结果显示，两者 阳性符合率为 94．6 ，阴性符合率为 83．4 ，总符合率为 91．5 ，表 明该方法有效可行。用建立的方法检测临床上不 同年龄阶段的猪血清 639 份，分析其临床感染情况。结果证 明该方法可用于猪轮状病毒流行病学调查、猪群抗体水平评估。 关键词 ：猪轮状病毒 ；内衣壳蛋白；间接 ELISA 中图分类号：$852．659．4；Q789 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2014)07—0001—06 轮状病毒 (Rotavirus，RV)属呼肠病毒科轮状病 l 材料与方法 毒属 ，是引起婴幼儿和幼龄动物腹泻 的一种病原Eli， 1．1 材料 感染猪轮状病毒 (Porcinerotavirus，PoRV)的仔猪 1．1．1 毒株、细胞 、血清 猪 A群轮状病毒 TM—a 以厌食 、呕吐、腹泻和脱水为主要临床特征 ，严重 的 株 由华 中农业大学农业微生物学国家重点实验室分 排水样粪便 ，导致仔猪死亡_2]。在全 国发生大规模 离保存 ；细胞 MA一104由中国典型培养物保藏中心 的仔猪病毒性腹泻，给养猪业带来 巨大的经济损失， 提供 ；猪轮状病毒 (PoRV)阳性血清、猪轮状病毒 猪轮状病毒也是引起仔猪腹泻的重要病原之一L3]。 (PoRV)阴性血清、猪传染性 胃肠炎病毒(TGEV)阳 轮状病毒基 因组由 l1个 dsRNA片段组成 ，分 性血清、猪流行性腹泻病毒 (PEDV)阳性血清、猪瘟 别编码病 毒 6个结 构蛋 白和 6个 非结构蛋 白 病毒(CSFV)阳性血清、猪繁殖与呼吸综合征病毒 (NSP)，结构很稳定 ]。VP6蛋白是重要的群抗原， (PRRSV)阳性血清 、猪伪狂犬病病毒 (PRV)阳性血 属于内层衣壳蛋 白，占病毒蛋 白总量的51 ，能够 清 ，由华 中农业大学农业微生物学 国家重点实验室 产生特异性抗原决定簇 ，而且在病毒的复制和装配 保存或制备 。 过程中发挥重要 的作用[5]。RV根据其基因组结构 1．1．2 主要试剂 限制性内切酶为宝生物工程 (大 和抗原性分为 A～G等 7个组 。A组、B组和 C组 连)有限公司产品；载体 pGEX-KG，由本实验室保 可引起人类和动物感染 ，而 D组 、E组、F组和 G 组 存 ；