猪链球菌2型毒力因子gapdh基因的克隆·表达及与Hela细胞互作蛋白的筛选.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgfi．Sci．2014，42(36)：12821—12824 责任编辑 李 占东 责任校对 李岩 猪链球菌2型毒力因子 gapdh基 因的克隆 ·表达及与 Hela细胞互作蛋 白 的筛选 袁芳艳 ，谭臣 ，雷丽 ，贝为成 ，刘泽文 ，郭锐 ，段正赢 ，杨克礼 ，周丹娜 ，田永祥 (1．湖北省农业科学院畜牧兽医研究所／动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉430064；2．农业微生物学国家重点实验室，湖北武 汉 430070；3．华中农业大学动物医学院，湖北武汉 430070) 摘要 [目的]克隆并在大肠杆菌中表达猪链球菌2型毒力因子gapdh基因，寻找与GAPDH互作的受体蛋白。[方法]扩增猪链球菌2 型甘油醛一3一磷酸脱氢酶gapdh基 因并构建表达质粒pET28a-gapdh。[结果]在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达 了约41kDa的融合蛋白 GAPDH。Westemblot试验说明GAPDH具有 良好的免疫学活性。利用新西兰大白兔制备抗GAPDH蛋白的多克隆抗体。运用配体重叠 技术，在 HeLa细胞 中初步找到了一个与GAPDH蛋白作用的潜在受体蛋白。[结论]为进一步研究猪链球菌2型的分子致病机理奠定 基础。 关键词 2型猪链球菌；GAPDH；原核表达；多抗制备；受体 中图分类号 S852．6 文献标识码 A 文章编号 0517—661l(2014)36—12821—04 Cloning，ExpressionofStreptococcussuisType2VirulenceFactorsgapdhgeneandScreeningforProteinwithHelaCell YUAN Fang-yan’，TANChen’，LEILi，TIANYong-xinag etal (1．InstituteofAnimalHusbandryandVeterinary，HubeiAcad— emyofAgriculturalSciences／HubeiKeyLaboratoryofAnimalEmbryoandMolecularBreeding，Wuhan，Hubei430064：2．CollegeofAnimal Science＆Veterinary Medicine，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan，Hubei430070；3．StateKeyLaboratory ofAgriculturalMicrobiol— ogy，Wuhan，Hubei430070) Abstract [Objective]Theaimwastostudycloning，expressionofs~eptococcussuistype2virulencefactorsgapdhgeneandscreeningfor proteinwithHelacel1．[Method]nleglyceraldehyde3-phosphatedehydrogenasegapdhgeneofStreptococcussuisserotype2(S．suis2，SS2) wasamplifiedbyPCR．andinsertedintotheexpressionplasmidpET28a．1ResultiAbout41kDafusionproteinwassuccessfullyexpressedin escherichiacolB121(DE3)．GoodimmunologicalactivityofCAPDHproteinwasconfirmedbywesternblottest．Thepolyclonalantibodiesof rabbitantiGAPDH proteinwaspreparated．Usingligandoverlappingtechnology，apossibleGAPDH proteinreceptorproteinswaspreliminaryly foundinHeLa．[Conclusion]ThestudylaidafoundationforfurtherinsightsintothemolecularpathogenesisofSS2． ． Keywords Streptococcus suissemtype2；GAPDH；Prokaryoticexpression；Receptor 猪链球菌病是一种 由猪链球菌 (Streptococcussuis)引起 细菌中，特别在一些