猪乳汁中抗猪传染性胃肠炎病毒IgA抗体间接ELISA检测方法的建立.pdfVIP

第 37卷 第 1期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．37，No．1 2015年 1月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Jan． 2015 doi：10．3969~．issn．1008—0589．2015．01．08 猪乳汁中抗猪传染性 胃肠炎病毒 IgA抗体 间接 ELISA检测方法的建立 闫贵伟 1,2，库旭钢 1,2，陈淑华 ，-，丁振江 ，-，何启盖 ， (1．农业微生物国家重点实验室，湖北 武汉430070；2．华中农业大学 动物医学院，湖北 武汉 430070) 摘 要：为建立检测猪乳汁中抗猪染性 胃肠炎病毒(TGEV)IgA抗体的间接 ELISA方法，本研究以TGEV重 组 N蛋 白为包被抗原，以辣根过氧化物酶标记羊抗猪 IgA为检测抗体 ，并采用方阵法确定包被抗原和待检乳汁 的最佳工作浓度，对各种反应条件进行优化，建立了猪乳汁中TGEVIgA抗体的间接 ELISA检测方法。该方法检 测稀释 160倍的阳性乳清仍呈阳性；与猪流行腹泻和猪轮状病毒感染阳性乳清无交叉反应；批 内和批间变异系数 均小于 10％。利用建立的ELISA方法与间接免疫荧光方法分别对 134份临床样 品进行检测 ，阳性检 出率分别为 58．2％(78／134)和59．7％(80／134)，总符合率为 85．6％。本研究建立的检测方法能够有效评估乳汁中TGEVIgA 抗体 的水平 。 关键词：猪传染性 胃肠炎病毒；IgA；重组N蛋 白；间接ELISA 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2015)01．0031-04 DevelopmentofanindirectELISA todetectIgA induced byporcinetransmissiblegastroenteritisvirus YAh／Gui-wei，，KUXu-gang，，CHENShu—hua，，DINGZhen-jiang。，HEQi—gai， (1．StateKeyLaboratoryofAgriculturalMicrobiology，Wuhan430070，China； 2．CollegeofVeterinaryMedicine，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China) Abstract：TodevelopearapidmethodtodetecttheIgAagainsttransmissiblegasrtoenteritisvirus(TGEV)inmilk，anindirect ELISA wasestablished with therecombinantN protein ofTGEV ascoating antigen．Theassaywasspecificfordetection of TGEV．buthadnocrossreactionwiht positivemilksamplescollectedfrom pigsinfectedwithporcineepidemicdiarrheavirusand rotavirus．Theassaywasalsohighlysensitive．andtheinrta—andinter-assayvariationswaslesshtan 10％．Testedon 134clinical samplesbybothindirectELISAandindirectimmunofluorescenceassay，thepositiverateswere58．2％(78／134)and59．7(80／134) nadthetotalCOincidenceratewas85．6％．ThismethodcouldbeappliedtoevaluateeffectivelytheofIgA le