陆地棉果胶甲酯酶GhPME6的克隆及功能分析.pdfVIP

棉 花 学 报 CottonScience 2014，26(5)：438-444 陆地棉果胶 甲酯酶 GbPME6的克隆及功能分析 王琳 I12，商海红 ，李俊文 。，王少干 ，刘爱英 ，石玉真 ，龚举武 ，巩万奎 。， 陈婷婷 。袁有禄 (1．华中农业大学生命科学技术学院，湖北 武汉 430072；2．中国农业科学院棉花研究所 ／棉花生物学国家重点实验室， 河南 安阳455000) 摘要：结合陆地棉SSH．cDNA文库的测序结果 ，与棉花EST数据库进行序列比对和分析，获得 1条在棉纤维 次生壁加厚期特异表达的EST序列．该序列编码果胶 甲酯酶(PME)。利用RACE技术获得其全长eDNA序列， 命名为GhPME6。基因结构分析表明，GhPME6包含 1个长度为 1560bp的开放阅读框、2个外显子和 1个 内 含子，编码含有519个氨基酸的蛋 白。其氨基酸序列具有PMEI和Pectinesterase两个保守结构域。通过对不同 棉属基因组中的PME6基因进行比对分析，发现 PME6在进化过程中具有高度保守性。qRT—PCR分析显示， GhPME6在纤维发育次生壁加厚期大量表达，推测该基因可能对棉纤维比强度有重要影响。构建GhPME6基 因的大肠杆菌表达体 系，获得与预期大小一致的目的蛋 白，为深入研究GhPME6对棉纤维比强度的影响奠定 了基础。 关键词：棉纤维；次生壁加厚；果胶 甲酯酶；比强度 中图分类号：$562．035 文献标志码 ：A 文章编号：1002．7807(2014)05—0438．07 CloningandFunctionalAnalysisofthePectinMethylesteraseGene GhPME6 inUp— landCotton W angLinu，ShangHaihong2，LiJunwenz，WangShaogan ，LiuAiyingz，ShiYuzhen2，GongJuwu2，Gong Wankui，ChenTingting2，YuanYoulu (1．CollegeofLifeScienceandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversi~,Wuhan，Hubei430072，China42．Instituteof CottonResearchofCAAS／StateKeyLaboratoryofCottonBiology,Anyang,Henan455000，China) Abstract：WiththesuppressivesubtractivehybridizationresultofacottonfibercDNAlibrary，anexpressedsequencetag(EST) sequence，which isspecifically expressed during the cotton fibersecondary wallthickening stage and encodespectin methylesterase，wasidentifiedfromthecoUonESTdatabase．ThecompletecDNA sequencewasobtainedbyrapidamplification ofcDNAends(RACE)technology，andnamedGhPME6．GenestructuralanalysisshowedthatGhPME6containedacomplete openreadingflameof1,560bp，includingtwoexonsandoneintron，andthegeneencodes519aminoacids．Itsaminoacidse— quenceconsistedoftwoconservativestructuraldomains：apectinmethylesteraseinhibitorregionandapectinesteraseregion． ThePME6sequencewasfoundtohavebeenhighlyconservedduringtheevolutionofdifferentGossypiumgenomes．Quantita—