硫化氢供体对Apo+E基因敲除小鼠动脉粥样硬化调节作用.pdfVIP

E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的调节作用 硫化氢供体对Apo 北京大学第一医院儿科(100034)王燕飞杜攀保 北京太学第一医院心血管研究所唐朝枢 教育部分予心血管病学重点实验室唐朝枢杜攀保 亡原因。众多学说仍然不能完全解释动脉粥祥硬化的发病机制。气体信号分子韵发现将动脉粥样硬化的形 成机制研究推向了一个全新的阶段。继一氧化氮(nitdeoxide，NO)和一氧化碳(carbonmonoxide，CO) sulfide，珏2S)，近年来也被发现在 之后，过去一鬟被认为是具有受鸡蛋气味毒性气体的硫纯氢(hydrogen 心血管系统中具有非常重要的生物学功能。H2S在衄管组织以L．半胱氨酸为底物经胱硫醚．v．裂解酶 发现新型气体信号分子H2s与血脂紊乱儿童的觑脂成分异常具有明显相关性。还有研究表明冠心病患者的 斑浆啦S水平下降，并嚣盘浆瓣2S水平的下降霹髓与冠心癍黪严重程度有关。||；乏上研究证明如S体系与脂 代谢紊乱和冠心病的发病有关。因此根据以上事实，我们推测H2S有可能也参与动脉粥样硬化的发病机制。 E基因敲除小鼠中探讨氇S黠动脉粥样硬优嚣调节作惩。 本研究在上述瑗论基础上在Aim 1．材料和方法 l。l研究对象 E壬)由北京大学医学部实验动物部提供，分 6周龄雄性正常C57BL／6J和ApoE基因敲除小鼠(Apo 为正常对照组、Apo E一书虢氢他镳(sodium E-，‘组和Apo 是H2S的供体，购自Sigma公词，其剂量为56lamol／(kg·d)，均为腹腔注射，普通饮食饲养至16周龄。 处死前禁食12h。眼球攘除法获得血液标本。瘸生理盐水及4％多聚甲醛从左心室逆行灌注豳定主动脉后， 自主动脉根部至腹主动脉末端离断整个主动脉。将所有小鼠主动脉近心端lcm切下，制备主幼脉根部冰冻 切片，每隔5lam连续切片，每间隔6张取l张，进行HE染色和油缎O染色。 1．2方法 1．2．1血脂测定动物禁食12h后，从眼球采血，分离血渍，取血清上样于日立全自动生化分析仪， 检测血清总胆固簿(totalcholesterol，TCHO)、低密度脂蛋自(10w。density 骚自(high—densitylipoprotein，HDL)禽量。 1．2．2主动脉病交的形态学观察分采取各组的主动脉寝部连续切片，进行油红O染色，动脉粥样硬 化斑块呈红色，全自动图像分析系统分析各组小鼠主动脉根部动脉粥样斑块面积，输入计算机图象分析系 统，蕊察并计算粥样斑块的蟊积，戳其平均值来表示每缰动脉粥样硬纯斑块蕊积的大小。 1．2．3血清H2S的测定从眼球取衄，置于未抗凝处理过的干试管，分离血清备用，．70℃低温保存。 逶过敏感硫电极溅定盘渍中酶妒，款藤阕接反应珏2S的浓瘦。步骤：(1)配镧标准硫离子溶液。(2)配 制抗氧化液。(3)血清飓s测定程序：电极在每次使用前须在去离子水中活化2小时以上。打开离子计， 将测定项调至mv档，斜率调至100％，将敏感骧电极与参毙电极～起浸入到样晶中，待读数稳定后纪录， 用去离予水冲洗电极，每测一个样品结束，电极浸入去离子水中以保持其活化状态。每次测定前应使用标 —一488-—— 准s。溶液划定标准曲线。 1．3统计学处理 II 应用SPSS ANOVA)，P0 05为差异具宵显著件。 2结果 59±311 2l血清血脂成份的含量与止常对照组小鼠相比，ApoE基因融除小鼠向清中TCHO【(12 vs 33±043vs013±0．03)“m01，L】的含量叫姑升高，HDLC的台最 2．32±040)}lmo扎]和LDL-C【(1 45±013vsl49_+0 『(O E基崮敲除小鼠 血清中TCHO