鸡传染性支气管炎病毒S1基因与猪IgG Fc基因在HeLa细胞中的融合表达.pdfVIP

中国兽 医学报 2008年 l0月 第28卷 第 lO期 CkinJ Sci Oct．2008 Vo1．28 No．10 1145 鸡传染性支气管炎病毒 S1基因与猪 IgGFc基因在 HeLa细胞 中的融合 表达 张明富 ，陈汉阳 ，彭 博 ，佟铁俦 ，陈焕春 ，郭爱珍 (11．华中农业大学动物医学院农业微生物学国 家重点实验室，湖北 武汉 430070；2．华中农业大学 湖北省预防兽医学重点实验室，湖北 武汉 430070) 摘要 ：根据 GenBank中发表 的猪 的 lgGFc段基 因及鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)S1基 因序列，设计并合成引物。 以猪肝组织总RNA 为模板扩增 出猪 IgGFc基 因，以含全长 IBVM41S基 因的质粒为模板扩增 出IBVS1基 因，分 别克隆至 T载体 。DNA测序表 明，所获得 的 IBVS1基 因大小为 1．5kb，IgGFc大小为 1kb，序列正确 。将 IBV S1与 IgGFc基 因串连 ，插入含有人组织型纤维蛋 白溶酶原激活物分泌信号肽序列(tPA)的真核表达载体 pcD— NA3．1一tPA上，在 HeLa细胞上进行瞬时融合表达。经免疫光和斑点杂交检测 ，表达产物 同时具有 IBVs1蛋 白和 IgG Fc活 性 。 关键词：禽传染性支气管炎病毒；S1基因；猪 IgGFc基因；真核表达；融合表达 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—4545(2008)10—1145—05 ThefusionexpressionofavianinfectiousbronchitisvirusSlgeneandporcineIgG Fcgenein HeLacells zHANG Ming—fu ，CHEN Han—yang ，PENG Bo ，TONG Tiechou ，CHEN Huan—chun～，GUO Ai— zhen (1．TheStateKeyLaboratoryofAgriculturalMicrobiology，CollegeofAnimalSci— enceandVeterinaryMedicine，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan 430070，China；2．Hu— beiKeyLaboratoryofPreventiveMedicine，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070， China) Abstract：AccordingtothepublishedgenesequencesofIBV M41S1geneandporcineIgG heaveychainFefrag— mentDNA inGenBank，wesynthesizedtwopairsofspecificprimers．TotalRNA ofswine1iverwasusedasthetem— platetoamplifyIgG FcgenebyRT—PCR．IBV M41S1genewasamplified byPCR from theplasmid encoding full lengthofSgene．BoththetwogeneswererespectivelyclonedintothepMD18T vectorsandconfirmedtobecorrect bysequencing．Theresultsshowedthatwehaveobtained therightgenesofIBV S1(1554bp)andIgG Fc(1002 bp)．BothIBV SlgeneandporcineIgG FcgeneweresubclonedintothesamepcDNA3．1-tPA vectorswiththetissue plasminogenactivator(tpA)leadersequenceandtheresultingplasmidwasdesignatedaspcDNA3．1_tPA IgG FcS1． HeIacellswereincubatedon6wellplatesandtransfect