鸡堆型艾美耳球虫单链抗体基因的构建及表达.pdfVIP

8201 　中 国 兽 医 学 报 　200 8 年 9 月 　第 28 卷 　第 9 期 　Ch in J Vet Sci 　Sep t . 2 00 8 　V ol . 2 8 　N o . 9 　 鸡堆型艾美耳球虫单链抗体基因的构建及表达 1 ,2 3 1 3 3 1 1 1 康桂英 ,赵月兰 ,秦建华 , 郭红 斌 ,包永 占 ,张 　宁 , 郭 　莉 　( 11 河北农业大学 动物科 技学 院 , 河北 保定 071000 ;21 内蒙古民族大学 动物科 技学 院 , 内蒙古 通辽 02 8000 ; 31 河 北农业大 学 中兽医学 院 ,河北 定洲 073000) 摘要 :轻链 可变 区和重链可变区基因产物等摩尔浓度混合后 , 用重 叠延伸拼接法扩增出单链抗体基 因 ,再用 带限制 ( ) 性内切酶位点的引物 N co Ⅰ和 H in d Ⅲ 扩增出带有特定酶切位点的单链 抗体基因片段 。N co Ⅰ和 H in d Ⅲ 双酶切 单链抗体与表达载体 p E T222b ( + ) ,用回收试剂盒回收酶切后的单链抗体与表达载体 p E T222b ( + ) 基因片段 ,用连 接试剂盒将单链抗体与表达载体 p E T222b ( + ) 基因片段连接 , 并将 连接 产物转化感受态细胞J M 10 9 。氨苄青霉素 筛选阳性重组子 , 以 T7p ro ot er / T7te r inato r p ri e r 进行菌落 PCR 鉴定 , 测定正确 后 ,37 ℃摇 菌扩增 ,测 菌浓度 至 D600 为 0. 6 时 ,加入 IP T G 诱导表达 ,对表达产物进行 SD S2PA GE 初步检 测 。SDS2PA GE 检测显示其相对分子 质量是 3 1 000 ,与预期结果一致 ,证明单链抗体基因在大肠杆菌中得到表达 。 关键词 :鸡 ;堆型艾美耳球虫 ;单链抗体 ;可变区 中图分类号 :S852 .723 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 : 100524545 (2 008) 0 92102 8204 Con st r uct ion an d expr e ssion of gen e of ScFv ant ibody for det ect ion of Ei er ia a cervu li n a sur face an t igen s 1 ,2 3 1 3 3 1 　　KAN G Gui2yin g , Z HA O Yue2la n , Q IN J ia n2hu a , GU O H ong2bi n ,BA O Yon g2zh an , Z HAN G 1 1 ( N in g , GU O L i 　 1. Col l ege o f A n i a l Science an d Te chnol og y , H ebei A g r icu lt u r al U ni vers i2 t y , B a od i n g , H ebei 071000 , Chi na ; 2 . Coll ege of A ni al Science an d Tech nolo g y , I nner M o ng oli a U ni ver si