反向遗传操作在牛病毒性腹泻病毒研究上及应用.pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜内科学分会 中国·南昌 第七届代表大会暨学术研讨会论文集 反向遗传操作在牛病毒性腹泻病毒研究上的应用 翁晓刚，朱要宏，王九峰 (中国农业大学动物医学院，北京100193) 摘要：反向遗传操作系统的建立为RNA病毒的研究提供了一个强大的工具。该技术从上世纪90年代开始被应用于 牛病毒性腹泻病毒研究工作，此后该病毒的分子生物学研究取得了长足的进展。本文综述了反向遗传操作在牛病毒性 腹泻病毒上的建立过程以及该技术在病毒生物型形成、病毒复制和病毒蛋白功能等研究上的应用及进展。 关键词：牛病毒性腹泻病毒；反向遗传；生物型；病毒复制；病毒蛋白 ofReverseGeneticonBovineViralDiarrhea Application VirusResearch WENG Yao—hong，WANGJiu—feng Xiao—gang，ZHU (CollegeofVeterinaryMedicine，ChinaAgriculturalUniversity，Beijfing100193) toRNAvirusresearch．Themolecularon Absn_ct：Theestablishmentofreverse a tool geneticsystemprovidedpowerful biology bovineviraldiarrheavirushasachieved afterthe ofreverse in1990s．Thisarticle significant application genetic improvements this there．,c朋t 011thevirus reviewedthe on virus,and historyof吐圮applicationrevel∞genetictechnology progress biotypes functionsofviral transformation,virus replication,and proteins． Words：BVDV；reverse replication；viralproteins Key genetic；biotypes；virus Vi豫l 牛病毒性腹泻病毒(BovineDiarrhea 染牛、羊、鹿以及猪等动物，目前广泛流行并呈全球性分布0-6J。它可引起动物表现出多种临床症状，从轻 也是该病毒能够持续存在并广泛流行的重要因素[8-9]。牛病毒性腹泻病毒属于有囊膜的小型RNA病毒，是 大约3900个氨基酸。由于该病毒在基因复制过程中不涉及DNA的合成，其基因组即为翻译蛋白的mRNA， 因此我们无法直接对其进行研究。为了实现在基因水平的操作，需根据病毒RNA序列得到eDNA(反转录 或人工合成)，并在此基础上进行改造，然后将eDNA直接导入受体细胞或体外转录得到感染性RNA，再导 入细胞而产生有活力的病毒。由于该过程能够由无生命活性的DNA序列得到有活性的病毒，因此又称为“病 毒拯救”。广义上说，凡是涉及到从基因水平研究遗传性状的过程都可以称为反向遗传。但是狭义上，RNA 病毒的反向遗传操作是指以构建感染性克隆为基础，并在此基础上对病毒进行改造并“拯救”，最后通过 研究改造病毒来揭示目的基因或蛋白的功能。反向遗传操作已经成为了研究BVDV的有力工具，其在病毒 复制、基因结构和功能、生物型的形成机制及病毒蛋白的功能等方面发挥了重要的作用。