硅表面免疫敏感膜制备方法研究.pdfVIP

H10 硅表面免疫敏感膜制备方法研究 余涛件董之海1谢剑炜24 1防化研究院第四所1022052军事医学科学院毒物药物研究所 100850 光纤免疫传感器由于同时具有免疫检测的特异性和光信号检测的高灵敏性，且仪器本身具有抗 干扰能力强，易于微型化，适宜于各种复杂环境使用等优点，一直是生物传感器研究的一 个热点，已被广泛地被应用到环境监测，食品卫生，临床检验以及反恐等领域Il巧】。 有关可特异性识别(俘获)靶分子的免疫敏感膜制备方法及工艺是光纤免疫传感器的研究的关 键技术之一。在光纤免疫传感器中，常用的敏感膜制备方法可分为物理方法和化学方法两 大类。物理方法指在成膜过程中，不发生针对生物识别元件(抗体)的化学反应。常用的 方法有物理吸附法、包埋法等【5i。化学方法是将抗体以共价键方式键合于基质表面，光纤 这类石英基质表面只能提供羟基参与反应，而抗体分子表面游离的氨基、羟基、酚基、巯 基、羟基、吲哚基、胍基、咪唑基等基团都可以参与反应，根据反应机理的不同，化学成 膜方法又可分为直接键合成膜法和双功能试剂交联成膜法两种。直接键合成膜法直接使用 活性试剂将抗体分子表面的可反应基团与光纤表面的羟基反应。BrCN法是这种方法的代 表161；双功能试剂本身具有两个功能基团，固定时，双功能试剂一端先与基质表面羟基反 应，另一端再与抗体分子表面的活性基团反应。丙氨基三甲氧基硅烷(APTS)／戊二醛法 J。 是目前应用较多的方法【7 本研究选择抗SEB的兔多克隆抗体作为识别元件，分别比较了物理吸附法、BrCN法、APTS／ 戊二醛法三种代表性的成膜方法。’ 1．实验部分 1．1实验设备与试剂 HP8453紫外．可见分光光度计、直径12．5mm石英圆片(北京玻璃研究所加工)o 盐酸、甲醇、浓硫酸、丙酮、柠檬酸、柠檬酸钠购于北京化学试剂公司(均为分析纯)、邻 苯二胺(OPD)购于华美生物公司。 a SEB购于军事医学科学院，兔源SEB多克隆抗体和鼠源的SEB单克隆抗体(防化研究院第四 所提供) 71l 2 实验方法 、o 双蒸水中煮沸30min。 液中，4C条件下放置18h。 2．3 2．4APTS／戊二醛法固定抗体1 后石英圆片，80℃条件下放置3h。取出石英圆片用水洗净，于10％戊二醛水溶液中，室温反应 过夜。 2．5三种制备方法固定抗体量的比较 用pH7．4PBS缓冲液配制封闭液(酪蛋白、BSA浓度均为2mg／mL，TritonX一100浓度0．1％)。 取上述四种固定方法处理过的石英圆片，每组方法三片，另取未经处理的石英圆片三片作对照 组，加入封闭液室温反应lh=pH7．4PBS缓冲液冲洗石英圆片；加入按使用手册配制的辣根过氧 物反应液37。C反应lOmin，加入0．5mLlmol／L硫酸中止反应；检测492nm处吸光值。 、 2．1比较四种制备方法对抗体生物活性的影响 液冲洗石英圆片。加入按使用手册配制的辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG，37。C反应40min； pH7．4PBS缓冲液冲洗；每一片与3mLOPD底物反应液37。C反应lOmin，加入0．5mLImol／L硫 酸中止反应：检测492nm处吸光值。 3 结果与讨论 3．1四种制备方法固定抗体量的比较 712 Table3—1Thedataofimmbolized contentsbetveenfourdifferentimmbolizedmethods antibody 。＼＼Numbe1 2’ 3 Average Methods＼ ＼ Blank 0．1280．04660．03650．0704