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第六届全国超临界流体技术学术及应用研讨会论文集 88 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 超临界状态对酶的影响研究进展 * 刘书成 谢燕 章超桦 宏武 洪鹏志 （广东海洋大 食品科技学院，广东，湛江，524025 ） 摘 要：超临界状态下的酶催化反应是近年来生物工程研究的新领域。本文重点 超临界状态对酶的稳定性和活性的影响、 超临界状态下酶的纯化及其失活机制等方面进行了综述。 关键词：超临界；稳定性；纯化；失活 1 前言 20 世纪80 年代以来酶催化科学的重大突破之一即为酶催化反应的介质由水介质发展到有机介质。特别是 近年的研究发现，酶在许多非极性溶剂中不仅可以保持其固有的催化活性而且其热稳定性大大提高。一般认 为，在非水体系中，溶剂和酶的相互作用类似于酶的天然细胞环境，故有时比纯水中表现更高的活性。而且 在非水溶剂中，底物更容易溶解，能得到更高的反应速率，此外还能简化分离过程，加强酶的专一性。然而， 传统有机溶剂中酶反应的产物中不可避免地残留或多或少的有机溶剂，易对食品和医药造成污染，这使得有 机介质酶催化的应用受到一定的限制。超临界流体具有有机溶剂的特点，特别是超临界CO2 其高效的萃取能 力在食品、香料、药物、化工等领域已经有着广泛的应用，并取得了一系列工业化的应用成果。1985 年Kamat 等人首次提出将超临界CO 作为酶催化反应的介质， 此人们根据超临界CO 与正己烷等有机溶剂相似的特 2 2 点，发展了超临界CO2 中酶催化反应的新方向。 2 超临界流体的选择及作为酶催化反应介质的特点 超临界流体状态下的酶催化反应，是近年来生物工程开拓的新领域。超临界流体作为酶催化反应的介质， 对其有着重要的影响。超临界流体能够改变酶的底物专一性、区域选择性和对映体选择性，并能增强酶的热 稳定性，同时酶在不同超临界流体中的活性也存在极大差异，因此对超临界流体的选择就显得特别重要。通 常，超临界流体的选择首先遵循两个最基本的原则：一是酶在超临界流体中必须具有较高的活性；二是超临 界流体的临界温度与酶的最适反应温度接近，因为操作温度通常与临界温度接近，温度过高会引起蛋白质变 性，使酶失活。同时还考虑到，临界温度和临界压力在实际生产操作是否易达到，反应底物在该流体中的溶 解度，超临界流体对底物、产物和酶的惰性以及对食品和药物无毒等因素。 常见的超临界流体主要有：CO 、SO 、C H 、C H 、C H 等等，其中最常用的是 CO 。超临界CO 是 2 2 2 4 2 6 3 8 2 2 [1] 一种优良的酶催化反应介质，主要具有以下独特的优点 ： （1）CO2 不仅临界点容易实现，而且对人体无害及化学惰性的优点，因此特别适于酶催化反应的介质； （2 ）超临界CO2 既具有液体的密度，又具有气体的扩散性和粘度，因此显示出较大的溶解力和较高的传 质性能， 而大大降低酶催化反应过程的传质阻力，提高了酶催化反应的速率； （3 ）反应底物的溶解性对超临界的操作条件 （如压力、温度）特别敏感，通过简单改变操作条件或其他 设备就可以达到反应物和底物的分离； 通讯作者：章超桦 （1956-），男，教授、博导，福建龙岩人，主要 事海洋生物资源综合利用的研究。 第一作者：刘书成（1977-），男，博士，河南邓州人，主要 事海洋油脂的高值化利用研究。 355 （4 ）由于酶在超临界CO2 中不溶解，易于实现反应分离一体化， 而使其得到工业化应用的可能性大大 增加； （5 ）超临界CO2 的临界温度低，不会使产物热分解，温和的温度适合酶催化反应，甚至可用于含热敏性 的酶催化反应之中; （6 ）超临界CO2 常压下变为气态，不存在溶剂残留问题，而且不易燃、不易爆、廉价