丹参主要居群DNA指纹图谱的建立.pdfVIP

湖南中医药大学学报 20cr7年8月第27卷 ofTCMUniv．ofHunan V01．27S1 280 Journal Aug．2007 丹参主要居群DNA指纹图谱的建立 王眷丽1．一，粱宗锁”，李殿荣2，王灏2，赵志新1 (1．西北农林科技大学生命科学学院，陕西杨凌712100；2．陕西省杂交油菜研究中心。陕西大荔715105) [摘要】丹参是一种重要的药用植物，本研究选取11个主要居群的丹参样品进行RAPD—PCR扩增。筛选出 6条特异引物建立丹参居群DNA指纹图谱，以鉴别不同居群丹参以及鉴别丹参与其它植物甘西鼠尾草、一串红、 油菜、小麦等。并对RAPD—PCR扩增体系及程序进行了优化。发现随着退火温度从36℃升至42℃，扩增产物增 多，亮带更亮；而暗带的变化因引物而不同，随退火温度的升高，一些引物扩增的暗带条数减少，而另一些增多。 (关键词】丹参居群；特异引物；DNA指纹图谱；优化 【中图分类号)R284．1[文献标识码】B [文章编号]1000-5633(2007)S1-0280-4)4 Miltiorrhiza 表l实验所用材料 丹参(Salviae Bge．1属唇型科(Labi． atae)、鼠尾草属(SalviaLinn)。是一种重要的药用 植物【”。其含有脂溶性二萜醌类(丹参酮类)和水溶性 的酚酸类化合物，可抗茵、消炎、治疗冠心病，还可改 善微循环、抑制血小板凝聚、减少心肌损伤和抗氧化 等；临床上是治疗心血管疾病的首选药物。但是由于 长期处于野生状态，品种混杂；市场上以次充好，以 假充真的现象时有发生，迫切需要运用现代技术建 立一套真实可靠、科学、易操作的标准对其进行鉴 定、鉴别。 和形态学、组织细胞、化学成分、同工酶、血清学 等标记相比，DNA分子标记具有不受外界环境条件 和生物个体发育阶段及器官组织差异的影响：遗传 稳定，物种问遗传多样性丰富，基因组包含的信息量 几乎无限等优点。本研究根据丹参主产区。选取四川 中江，陕西商洛、山东、北京、江苏、山西等11个居群 的丹参样品进行RAPD—PCR扩增。筛选多条特异引 物建立DNA指纹图谱，以鉴定、鉴别不同居群丹参 注：AI—AIl为各居群编号，详见表1，以下同。 及伪品。 鲜重3％的PVP(聚乙烯吡咯啉酮)粉末，冰浴研磨 l材料与方法 成匀浆，分装予1．5mL离心管中。加2％13一巯基乙 醇预洗。沉淀加2％CTAB提取缓冲液并加样品鲜 1．1实验材料与试剂、主要仪器 重4％的活性炭于65℃提取。加一20℃预冷的氯仿， 收集全国各地丹参资源，以来源命名，列于表1。 异戊醇(24：1)0℃萃取，离心。上清加2，3体积一20 ℃预冷的异丙醇沉淀DNA。一90℃真空冷冻干燥 实验仪器：PCR扩增仪(Eppendorf-5333)；冷冻 DNA后，加适量双蒸水溶解，加RNase(终浓度为 离心机(SIGMAl一1SK型)；电泳装置(北京六一仪 100 器厂)；凝胶成像系统(BIO—RAD768100723)；可 见一紫外分光光度计(Beckman 戊醇(25：24：1)混合液抽提蛋白。一20℃预冷的异丙 DU640)。 实验所用引物及主要试剂购于上海生物工程技 醇沉淀DNA。一90℃真空冷冻干燥DNA后加适量 术有限公司。