茶树GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶基因cDNA全长的克隆与表达分析.pdfVIP

茶叶科学2015 ，35 （1）：55~63 Journal of Tea Science 投稿平台： 茶树GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶基因cDNA 全长的克隆与表达分析 1 1 1,2 1 1* 肖瑶 ，周天山 ，李佼 ，张佳欣 ，余有本 1. 西北农林科技大学茶叶研究所，陕西杨凌712100 ；2. 汉中市农业科学研究所，陕西汉中723000 摘要：抗坏血酸 （Vc ）是重要的抗氧化剂，在茶树体内的各种生理代谢及抵御非生物胁迫中起重要作用，Vc 含 量关系到绿茶品质优劣。GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶 （GMP ）是茶树 Vc 生物合成途径中的关键酶之一。本研究 通过 RACE-PCR 方法从茶树中克隆了 GMP cDNA 全长序列，共计 1510 bp ，其中包含 1 086 bp 的开放阅读框 （ORF ），编码 361 个氨基酸，推测蛋白分子量为 39.599 kDa 。BLAST 分析表明，茶树 GMP 基因氨基酸序列 与猕猴桃的亲缘性最高，达到 96% 。实时定量 PCR 分析表明，茶树新梢芽下第三叶中 GMP 基因表达量最高， 嫩茎中最低，不同品种茶树新梢叶片中表达量存在明显差异。高温胁迫初期，GMP 基因表达量及抗坏血酸含量 迅速升高，然后逐渐下降且均低于同期对照。 关键词：茶树；GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶；基因克隆；表达分析 中图分类号：TS272.5 ；O614.23+ 1 文献标识码：A 文章编号：1000-369X （2015 ）0 1-055-09 Cloning and Expression Analysis of GDP-D-mannose Pyrophosphorylase cDNA in Camellia sinensis 1 1 1,2 1 1* XIAO Yao , ZHOU Tianshan , LI Jiao , ZHANG Jiaxin , YU Youben 1. College of Horticulture, Northwest Agriculture Forestry University, Yangling 712100, China; 2. Hanzhong Agricultural Science Institute, Hanzhong 723000, China Abstract : Ascorbic acid (Vitamin C, Vc) is an important antioxidant in tea plant, playing important roles in metabolism and responses to abiotic stress, and tea quality is positive correlation with the content of Vc . GDP-D- mannose pyrophosphorylase (GMP) is an important enzyme in the synthesis of ascorbic acid. The full-length cDNA sequence of GMP gene was isolated from the shoots of Camellia sinensis by RT-PCR and RACE. The entire GMP cDNA was 1 510 bp, containing a 1 086 bp complete open readin