助孕3号方对妊娠大鼠甲氰菊酯染毒模型生殖毒性和胚胎神经毒性的作用与机理研究.pdfVIP

第六届全国生殖免疫学大会暨学术交流会论文汇编 助孕3号方对妊娠大鼠甲氰菊酯染毒模型生殖毒性和胚胎神经毒性的 作用与机理研究 罗颂平欧阳惠卿(广州中医药大学第一临床医学院) 摘要：目的：建立妊娠期拟除虫菊酯农药染毒模型，研究甲氰菊酯对妊娠大鼠的生殖毒性和 胚胎神经毒性，并研究补肾健脾中药复方对胚胎的保护作用。方法：以10周龄SPF级雌性 SD大鼠，在妊娠第1．15天分别用甲氰菊酯原药和制剂染毒，按LD50的1／20剂量灌胃给药。 以补肾健脾中药复方助孕3号高、中、低剂量干预，牛磺酸作对照。结果：模型组的流产率 mRNA呈高表 达到54．54％，中药和牛磺酸均能显著降低流产率；模型组胎鼠组织的Cx43 达，胎鼠脑组织Cx43蛋白亦呈强染色．模型组血清IFN-7水平显著高于中药高剂量组和正 向THI的方向偏移，不利于妊娠的维持{模型组孕鼠的血清E2水平在组间最高，与中药高、 中剂量和牛磺酸组比较，P0．05。结论：妊娠期大鼠甲氰菊酯染毒可导致流产率显著上升、 血清E2水平过高和THlfIH2细胞因子失衡。助孕3号对妊娠期大鼠甲氰菊酯原药染毒模型 母体和胚胎具有保护作用。在致畸敏感期能有效地拮抗甲氰菊酯原药的生殖毒性和胚胎神经 毒性，对孕鼠的E2水平和E2／P平衡，THl／TH2细胞因子的平衡具有一定的调节作用。 目前，环境内分泌干扰物对人类生殖健康的影响已日益受到重视。其中，尤其以农药残 留、污染的问题较严重。本研究旨在探讨拟除虫菊酯农药对妊娠大鼠模型的生殖毒性和胚胎 神经毒性，并研究补肾健脾中药复方对胚胎的保护作用。 材料与方法 经交配。由广东省医学实验动物中心提供。 药物：助孕3号方(喷雾干燥法制备)；牛磺酸：湖北潜冈永安药业有限公司。 造模用农药：甲氰菊酯：大连瑞泽农药股份有限公司，含量99．2±0．2％； 甲氰菊酯制剂(灭扫利20％-}L油)：浙江威尔达化工有限公司。含量20_+1．o％。 造模方法：观察雌鼠阴道涂片一个周期，在第2个周期的动情期与雄鼠按2；l合笼，以阴 道涂片出现大量精于为妊娠第1天(D1)，开始用甲氰菊酯染毒，按LD50的1／20剂量，用 玉米油、吐温80稀释，灌胃给药，灌胃量为0．5ml／100克体重。共15天。 实验分组：随机分为7组。 B染毒2组：D1始灌胃予甲氰菊酯制剂3．85mg／kg／d，4h后以3ml生理盐水灌胃，15天； 一74— 第六届全国生殖免疫学大会暨学术交流会论文汇编 4h后以助孕3号药液灌胃(成 C中药高剂量组：D1始灌胃予甲氰菊酯原药6．775mg／kg／d， 人等效剂量4倍，按照大鼠体重系数换算)，15天： 4h后以助孕3号药液灌胃(成 D中药中剂量组：D1始灌胃予甲氰菊酯原药6．775mg／kg／d， 人等效剂量2倍)，15天； 4h后以助孕3号药液灌胃(成 E中药低剂量组：D1始灌胃予甲氰菊酯原药6．775mg／kg／d， 人等效剂量)，15天； F牛磺酸对照组：按A组染毒，4h后以灌胃给予牛磺酸0．2克／Kg。15天； G正常妊娠对照组：每日用等量玉米油灌胃，15天。 指标测定： 体重与主要脏器系数；D1、D6、D15称量大鼠体重。D15解剖取肝、脾、卵巢、子宫。称 重，计算脏器／体重比值(脏体比)。 活胎数、流产数与吸收胎数；纵向剖开子宫，计算总胎数、活胎数、流产数与吸收胎数。 判断标准： A活胎：胎鼠大小符合胎龄，可观察到胎鼠心脏搏动和(或)运动； B吸收胎：早期——仅有胎盘母体部及胎盘胎儿部存在：中期——除上述组织外，还有一 些胎儿组织； c流产：母鼠体重显著下降，子宫呈“竹节状’’，仅见到胚胎着床点，子宫内没有胚胎。 每只母鼠取右侧子宫第1只和左侧子宫最后一只胎鼠，液氮保存，送检Pax3和Cx43mRNA。 取左侧子宫第1只胎鼠，取全脑，固定，包埋，免疫组化法检测Cx43蛋白。 其余胎鼠分别称重，从头顶部到尾跟部测身长，从尾根部到尾尖部测尾长。 mRNA的测定：合成引物和探针。