猪源支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因的原核表达及其免疫原性与抗体检测ELISA方法研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十=坡学术研讨会 性。本试验发现鼬不能凝集鸡的红细胞。这可能与细菌寄生范围具有种属特异性有关，因 为占6广泛感染哺乳动物。并不感染禽类。 DNT是肋定居于上呼吸道所必需的因子。此外。DNT也可通过损坏呼吸道内正常情 况下的保护层上皮细胞而间接地促进菌株附着作用。乳鼠皮肤坏死试验定性说明本菌具有皮 肤坏死毒性，但表现出不同的生物学毒性，这可能是因为不同分离株产生DNT的能力有所 差别。该试验也说明我国存在着不同致病力的B6菌株。进一步选择对乳鼠皮肤坏死试验中 表现毒性最强的菌株HH0809进行BalB／C小鼠呼吸道途径的感染试验。结果攻毒鼠表现出 了典型的肺炎和呼吸道症状。由于呼吸道感染途径与天然感染途径相一致，相信该攻毒途径 较静脉和腹腔途径的感染方式更加可靠。感染模型的建立为进一步开展肋的病理学研究、 疫苗的效力检测等奠定基础。 4结论 本研究从全国分离鉴定猪源肋及其它常见细菌性病原，对肋在我国的流行病学分布、 协同感染特性、药物敏感性和生物学特性进行研究，有利于我国猪波氏苗病，特别是猪萎缩 性鼻炎的防治，也为该病快速诊断试剂及高效疫苗的研制、开发奠定基础。 参考文献略 猪源支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因的原核表 达及其免疫原性与抗体检测ELISA方法研究23 赵战勤，薛云，昊斌·。溺细彪．何华．胡睿铭，张建民，陈焕春 (华中农业大学动物压擘院农业微生物学固家重点实验室武汉430070) 摘要z支气管败血波走杆茵(踟胁fP妇6m^打印ffc岛肋)可引起猪发生肺炙和萎缩性鼻交．更重要的是。 谊茸的先期感染易于导致其它多种病原的继发感染，加重病情造成较严重损失．百日咳杆菌黏附素是由且6 p州基因嫡码的一种重要的黏附固干，被认为是肋最主要的保护性抗原．本研究克隆了猪源鼬强毒株 埘{0809的P丌l基因，利用谷胱甘肤-S-转移酶(GSD表选系统在大肠杆菌中进行了融合表迭．克隆基因的 桉苷酸和氨基酸序列与Ge眦BaIllc已经提交的所有猪源肋的胛序列均具有98％以上的同源性．利用 P∞tP猢软件对融合表达蛋白的理化性质进行预测分析，结果显示不稳定系数为38．33，属于稳定型蛋白 质．sDs-BAGE和w妇cmblot检测证实谊基因获得高效表达井具有良好的免疫擘活性．经GsT融台蛋白 纯化试剂GI岫IlIIj∞c seph蛐地1M4B纯化后．得到浓度为207．3¨咖L，纯度为90．1％的融舍蛋白 GsT-PRN．在小鼠免疫保护力试验中，重组蛋白克疫组BalⅣc小鼠能够抵抗3．2xLD蚰量的m强毒株 聃0809的呼吸道气雾攻击，保护率为100％(20陀0)’而GST栽体蛋白对照组和PBs空白对照组的小鼠 分别存活了4只和3只．这证明原核表迭的PRN蛋白具有天然PRN外膜蛋白的免疫效力，可考虑作为新 型疫苗或疫苗添加成分．通过凝血酶T1Irombin酶切融合表达产物GsT-PRN并回收，获得纯度为93．1％， 浓度为120．5斗卧IlL的不舍GsT栽体蛋白的PRN蛋白片段．以PRN蛋白片段为抗原建立检测百日唛杆菌 黏附素抗体的间接ELIsA方法．方阵滴定结果显示，血清最佳稀释度为l：40．PRN抗原最佳稀释度为1：320 (43．9p彬LX阴阳性临界点为0．335．重复妾验中变异系数最大为7，83％．最小为3．51％．猪巴氏杆茵痛， 猪大肠扦茼病．仔猪剐伤寒，猪传染性胸膜肺吏，副猪嗜血杆茸蒋．猪链球茸病、猪气喘病阳性血清和5 份猪波氏茵病阴性血清用ELlsA检测都呈阴性．ELIsA方法对2份接种了猪波氏茸病灭活菌苗的猪血清和 2份Bb感染猪血清的检测蛄果均为阳性．敏感性试验表明，谖ELIsA方法的敏感性比本实验室已经建立 的乳胶凝集试验方法高4一128倍：．I耋ELIsA方法能够检测到人工感染肋仔猪14d的血清抗体IgG．谊 ELIsA方法对临床送检的1229份猪血清的捡测阳性率为32．7％．同时，谊方法对湖北2个阳性猪场各年龄 段猪群的临床监测结果表明，生长前期(36一酆日龄)和育肥期(56—90日龄)楮群的阳性率明显高于断 重复性、特异性和敏感性，有望成为一种准确、快速和实用的猪波氏茸病血清学诊断方法． 站基盎项目：国束自然科学基盎项目和863项目资． 作者简介：赵战姑(1980-)。男，河南开封人．博士研究生，研究方向为细菌分子生物学和基因工程疫苗． Bnlail：曲∞曲衄qiⅡ@126．c0III．