马立克病的实验室诊断(琼扩试验).pptVIP

技能训练9 马立克病的实验室诊断（琼扩试验） 掌握鸡马立克病的实验室诊断方法 10×100mm试管若干只、玻璃棒（直径6～8mm、圆头长约16cm）4～6只。胶头吸管18～20只、烧杯或搪瓷缸4～6个，玻璃平皿、精制琼脂粉、打孔器（直径3mm和6mm）、8%pH7.2～7.4的钠、钾磷酸盐缓冲液、标准抗原、阳性血清等 方法步骤 （一）1%琼脂平板制备 （二）加样 （三）反应 （四）结果分析 （一）1%琼脂平板制备 制板： 用8～10%氯化钠溶液配制1%琼脂溶液，电炉加热使充分溶化后，倒入直径90 mm培养皿，制成厚度为2.5～3mm琼脂平板；平置，在室温下冷却凝固后打孔。 打孔： 在琼脂板上按7孔一组的梅花形打孔（中间1孔，周围6孔），孔径5mm，孔距2～5mm，将孔内的琼脂用针头斜面向上轻轻将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。 封底： 用酒精灯轻烤平皿底部至微烫，封闭孔底部，以防侧漏。 编号：将周边孔编号1～6 （二）加样 1．检测羽髓中马立克病病毒抗原（MDV抗原） 向中央孔加MD阳性血清 向周边1、4孔加标准MD琼扩抗原 向周边2、3、5、6孔加待检羽髓浸提液，选拔受检鸡含羽髓丰满的羽毛数根（幼鸡8根以上，成鸡3～5根），将带有羽髓的毛根剪集于试管内，每管滴加2～3滴生理盐水，用玻璃棒将羽毛根压集于管底，以适当的压力转动玻棒10多次，