奶牛瘤胃微生物BAC文库中脲酶克隆的筛选与分析.pdfVIP

中国农业大学学报 2008，13(6)：61～65 JournalofChinaAgriculturalUniversity 奶牛瘤 胃微生物 BAC文库中脲酶克隆的筛选与分析 赵圣国 王加启 卜登攀 刘开朗 李 旦 于 萍 魏宏阳 周凌云 李发弟。 (1．中国农业科学院 北京畜牧兽医研究所 ／动物营养学 国家重点实验室，北京 100193； 2．甘肃农业大学 动物科学技术学院，兰州 730070) 摘 要 利用脲酶选择性培养基 ，从奶牛瘤 胃微生物BAC文库的 15360个克隆中筛选得到了12个脲酶克隆。利 用酚一次氯酸法对脲酶克隆子 的酶学性质分析 ，表 明均具有不 同的尿素分解能力，酶的活力范围是 3O～2466u／ mg。脲酶阳性克隆插入片段大约是 6Okb，限制性 内切酶 HindⅢ酶切 图谱表明，各个克隆具有不同DNA片段 ，其 中脲酶 Urease1、Urease3、Urease4和 Urease9的最适 pH8．0，最适温度为 6O℃。本研 究从奶牛瘤 胃微生物 BAC 文库中筛选到了具有脲酶酶活特性的克隆。 关键词 瘤 胃微生物 ；细菌人工染色体文库 ；筛选 ；脲酶 ；酶学性质 中图分类号 Q55；Q 785 文章编号 1007—4333(2008)06—0061～05 文献标志码 A ScreeningandanalysisofureaseclonesfrOm rumenbacterial artificialchromosome (BAO)library ZHAO Sheng—guo，，WANG Jia—qi，BU Deng—pan ，LIU Kai—lang ，LIDan ，YU Ping’， WEIHong-yang’，ZHOU Ling—yun ，LIFa—di (1．StateKeyLaboratoryofAnimalNutrition／InstituteofAnimalScience，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China 2 AnimalScienceandTechnologyCollegeofGansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China) Abstract Using ureasesegregationagar-twelveureasepositive cloneswereobtainedfrOm the rumenbacterialartificial chromosomelibrarycontaining15360clones．Theyhaddifferentureahydrolysisactivities，rangingfrom 30to2466U／mg baesdOnphenol—hypochloriteureaseassay．Theinsertsizeinureaes positivecloneswasabout60kb．Theelectropherogram ofHindⅢ digested ureasepositive clonesrevealed thattheyhad differentDNA fragments．And theoptimum pH and temperatureOfUrease1，Urease3，Urease4andUreaes 9cloneswere8．0and60℃ respectively． Keywords rumenbacterium；bacterialartificialchromosome (BAC)Iibrary；screen；urease；enzymaticproperties 尿素酶 (urease)系统命名为酰胺水解酶 (urea 生物之间形成了紧密、复杂的共生关系，难以分离和 amidohydrolase)，编号为 EC3．5．1．5。它能催化尿 纯培养 。研究表 明牛瘤 胃中至少有 89 以上的微 素水解产生氨和氨基 甲酸酯 ，氨基 甲酸酯又能水解