异黄酮类化合物精制方法的研究现状.docVIP

异黄酮类化合物精制方法的研究现状 异黄酮类化合物是一类具有植物雌激素活性、增强机体抗氧化能力、提高免疫机能以及抗癌等多种功效的生物活性物质，很具有开发价值，近年来成为国内外的研究热点。 目前，国内对于各种植物中黄酮和异黄酮类化合物的提取和精制工艺研究较多，但将其应用于工业化生产仍存在一些问题，主要有以下两点：①高投入，低产出，导致成本过高。表现在生产耗时长、耗能高、污染环境方面；②由于仪器设备条件有限，国内产品的质量（主要指高纯度和安全指标）难以达到要求。 因此，要得到质优且成本较低的异黄酮产品，仍需对其生产工艺进一步研究和探索，以找到一套更适合于工业化生产、更高效的生产工艺。本文对异黄酮类化合物的几种主要精制方法的各自特点和应用情况进行综述，希望为研究者提供一些研究基础和参考。 1 异黄酮类化合物的来源、结构、种类和理化性质 异黄酮类化合物主要存在于豆科植物（如大豆、红三叶草、野葛）中，目前已经发现的有几十种。这是一类以3-苯基苯并吡喃酮为母体的多羟基酚类，由于其结构与雌二醇相似，故称为植物雌激素。不同来源的异黄酮化合物的主要成分和含量也有所不同。按结构划分，异黄酮类化合物主要有3类：葡萄糖苷配基、葡萄糖苷、酰基化葡萄糖苷，在植物中主要以后两种形式存在，少量以游离配基的形式存在[1，2]。研究表明，这3种类型中以葡萄糖苷配基的生物活性最高。 异黄酮类化合物易溶于丙酮、乙醇、甲醇、乙酸乙酯等极性溶剂中。在水溶性上，与其结构有关，游离形式的配基水溶性最差，基本不溶于水；葡萄糖苷和酰基化葡萄糖苷一般易溶于水，但同是葡萄糖苷的染料木苷却难溶于水，水中的溶解度在4～50 ℃时无明显变化；在70～90 ℃时其溶解度随着温度的升高而显著增加。因此，在用水溶液提取异黄酮时，温度应超过70 ℃。酰基化葡萄糖苷在加热和碱性条件下可以水解去掉酰基而转化成葡萄糖苷。碱水解的pH值为8～13，水解程度随pH值及温度的升高而加大。葡萄糖苷在强碱、高温或酶存在的条件下可水解去掉葡萄糖基而转变成葡萄糖苷配基形式[3]。 2 异黄酮类化合物的精制方法 2.1 吸附法 大孔树脂吸附法是吸附法精制的代表，也是目前对总异黄酮进行精制使用的最广泛也较为有效且环保的方法。其工艺流程为：浸提液→吸附树脂吸附→解吸→干燥。 其中浸提液吸附前需初步除杂（如脱脂、脱色、除蛋白、澄清处理等），吸附树脂需进行乙醇溶胀，并用稀酸及稀碱洗去残留有机物的预处理。此工艺是采用吸附树脂吸附浸提液中的大部分异黄酮类化合物，去除浸提液中的蛋白质、单糖、多糖及其它物质，从而起到精制作用。树脂吸附后用解吸液进行解吸，将解吸液干燥后即获得产物。很多研究者用树脂吸附法对不同来源的异黄酮粗提物进行精制试验发现，纯度均有不同程度的提高[4-7]。刘国庆[5]等（2004）在对大豆乳清废水中异黄酮吸附影响因素的研究中表明，采用了梯度洗脱和二级吸附工艺发现，只采用“纯水淋洗→8%乙醇淋洗→80%乙醇洗脱”的梯洗工艺可使纯度由一次洗脱工艺的8.8%增至14.5%；结合二级吸附工艺，即将梯洗所得洗脱液浓缩至醇含量低于5%，加水稀释后再次上柱吸附，则可使纯度增至42%以上，回收率在75%以上（以染料木素为对照品的紫外分光光度法测定）。蒋永红[6]等（2002）在对大豆异黄酮提取分离工艺的探索中，使用D101-A型大孔树脂进行纯化，采用“吸附→水洗→20％乙醇淋洗→80％乙醇解吸”的工艺发现，水洗和20％醇洗所损失的异黄酮量小于5％，而在解吸液中异黄酮高达94.34％，解吸液与上柱物料相比，异黄酮含量增加了10倍以上，达8.23％（以大豆苷元和染料木素为混标的HPLC法测定）。李崇明[7]（2004）在对红车轴草异黄酮的精制研究中也采用此方法，得到了较满意的结果。 由于大孔吸附树脂价格较低且可重复使用，易再生，纯化效率及得率较高，污染小，操作不复杂，故此法具较强推广性。弊端是大孔吸附树脂作为化工产品存在有机物残留的问题，故此法精制的异黄酮现不允许作保健食品用。另外，此法作为工业化生产的方法效率还是偏低。 2.2 超滤膜法 超滤是根据纯化的目的物和杂质的分子大小选择一定的膜孔径，在一定的压力和温度下，控制透过速率使目的物通过，截流住大分子的杂质，从而达到分离纯化的目的[8]。单纯采用超滤膜法精制异黄酮的纯度不够理想，通常将其与其它方法（主要是树脂吸附法）结合使用，利用其去除部分杂质，减轻了吸附树脂的负担，对提高纯度大为有利[3]。但受实验条件限制，超滤膜法应用较少。 2.3 溶剂提取（萃取）法 异黄酮类化合物在一些有机溶剂中溶解度较大，所以可以通过高温浸提或常温萃取分液对其进行精制。此法相对应用也较广泛，溶剂法的弊端在于耗费大且操作过程中有不同程度的污染。 2.3.1 乙酸乙酯萃取法 乙酸乙酯是提纯精制异黄酮类化合物的