微流控芯片在疾病诊断应用.pdfVIP

微流控芯片实验室进展 微流控芯片在疾病诊断中的应 赵建龙 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 TAS)，自从Manz等在20世纪90年代首次提出这一 微流控芯片又称微全分析系统(u 概念以来，经过十余年的发展已成为生化分析的一个独立领域，微流控芯片具有快速、高效 分析、低消耗和微型化等特点，获得了越来越广泛的认可和应用。本文结合本实验室的研究， 着重从基因分析、蛋白质分析和细胞分析等方面讨论了微流控芯片技术在疾病诊断领域中的 应用。 1基因分析 1．1DNA提取与扩增 将样品预处理到DNA扩增集成在一起怀还有相当难度，因为实验室通常采用的DNA提取方 法存在很多缺点，如酚／氯仿提取法，需要多步离心，对设备的要求比较高，不容易集成到 芯片上。使用的有毒有机溶剂会造成环境污染，危害操作者的健康。采用多层SU一8模具的光 刻技术及微细加工技术，能方便制得立体结构的PDMS微流控芯片，且SU一8模具可以反复使用。 加工工艺简单，成本低廉，可以一次性使用，避免了实验上的交叉污染，也避免了在硅或玻 璃上制作微流控芯片的复杂加工工艺、高成本等。利用微型加热器对细菌菌液热裂解，在芯 片反应微池中填充纳米磁珠，利用纳米磁珠良好的磁可操控性，在微流控芯片中完成DNA的 提取，将纳米磁珠提取的DNA作为PCR反应的模板进行PCR扩增。在芯片上实现了细菌热裂解、 DNA提取、PCR扩增反应，为DNA分析的完全系统集成提供了可能。 1．2基因分离检测 常规的DNA片段分析方法是琼脂糖平板凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，这两种方 法一般能够满足通常PCR产物及其它DNA片段的分析要求。但琼脂糖平板凝胶电泳的分离效 率较差，不能分离相差几个碱基的片段，且检测灵敏度不高。聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳具有 很好的分离能力和高的检测灵敏度，但是分析过程十分复杂而且费时。传统毛细管电泳是 DNA片段分析的有力方法，但分析时间一般也需要半小时或更长时间。因此发展一种分离能 力好、检测灵敏度高、分析速度快的方法十分必要。我们利用微通道电泳芯片系统实现了 DNA片段的快速高效分析，并对结核杆菌基因组PCR产物进行了分析，整个电泳过程只需要 4分种左右，可用于结核杆菌耐药性的基因检测。 2蛋白质检测 2．1同工酶检测 乳酸脱氢酶(LDH)是由A和B两种亚基以不同比例组成的四聚体，可形成5种同工酶， 乳酸脱氢酶同工酶的活性是临床中诊断肝脏、心血管和血液等疾病的重要指标，传统检测一 般采用醋纤膜、琼脂糖电泳、毛细管电泳、免疫化学法、ELISA法、单克隆及化学法等，这 些方法均需及逆行能够洗脱或扫描，操作费时，需要特殊设备及一定的操作技巧。我们在集 成温控装置的微流控芯片上实现对同工酶与辅酶反应进程的控制，完成同工酶的进样、孵育 反应、电泳分离和活性检测的实验步骤，建立了基于微流控芯片的同工酶荧光检测系统，使 用360hm光源激发辅酶产生荧光，在460hm处选择性采集荧光信号，在微流控芯片上实现同 工酶样品的快速活性检测，酶活性检测限达到O．5U／L。 2．2尿蛋白检测 21 大会报告 尿蛋白的电泳分离是用于肾损伤诊断和类型鉴别诊断的重要检测手段。传统的尿蛋白检 测方法如免疫法，检测方法复杂，诊断试剂盒昂贵。临床上一般采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、 琼脂糖凝胶电泳以及醋酸纤维素薄膜电泳等方法，但这些方法操作繁琐，耗时长；市场上虽 有自动化的仪器出售，如Helena的REP全自动电泳仪，但仪器及配套试剂价格昂贵。采用 ～iEMS技术制作了毛细管电泳微芯片，并研制了电泳微芯片尿蛋白检测仪，以硼酸盐缓冲液、 乙胺作为微流控芯片电泳缓冲体系，利用蛋白质的紫外吸收特性，在210nto波段检测吸光度 并进行信号收集和分析，分析了妊娠高血压症、风湿性心脏病、肾病综合症和多发性骨髓瘤 等患者尿样本，完成每个样本的分析仅需2min，提高了分析效率，具有较好的一致性。 2．3脂蛋白检测 heart disease，C皿)的发病率呈逐渐