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冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂 拼音dònggānrénníngxuèyīnzǐⅧnóngzhìjì 冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂制造及检定规程[1]本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的新鲜血浆分离、提纯、冻干并经病毒灭活制成。主要成份为人凝血因子Ⅷ及少量纤维蛋白原，含适量枸橼酸钠，不含防腐剂。本品对缺秒人凝血因子Ⅷ所致的凝血机能缺陷具有纠正作用，专供防治甲型血友病患者的出血症状。制造1.1制造要求1.1.1　对血浆的要求所用之血浆来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》要求，血浆应无凝块、无纤维蛋白析出，非脂血，无溶血。在采集时应减少皮肤损伤，保持血流通畅，并与抗凝剂充分混合，用塑料袋采集。新鲜分离液体血浆或新鲜冰冻血浆及冻结冷沉淀，均可用于生产。分离后的血浆应保持无菌，并应及时冰冻保存。自采血到冻结一般在8小时内完成。液体血浆应在4±2℃贮放，贮放时间应不超过小时，最长不得超过12小时。冰冻血浆（-30℃以下）保存期不超过6个月。1.1.2　对制造工作室、设备及原材料的要求，与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1.3～1.1.4项要求相同。1.2　制造工艺1.2.1　采用低温乙醇法或冻融法制得冷沉淀，经抽提、吸附、精制，亦可采用经卫生部批准的其他工艺制备，并经卫生部批准的适宜方法进行病毒灭活处理。1.2.2　分批同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批，不同滤器和不同机柜冻干的制品分为亚批。1.2.3　稳定剂及防腐剂制品内允许加稳定剂，制品应不含防腐剂。1.2.4除菌过滤及分装本品应用微孔薄膜过滤，可直接分装无菌的成品瓶内，每瓶装量根据效价及规格确定。1.2.5　半成品检定每批半成品应进行效价测定及热原质试验，并按亚批做无菌试验。1.2.6　冻干除菌过滤分装的制品经外观检查后立即冻结，并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》1。2。5项规定进行冻干，但制品温度不得超过35℃。1.3　规格每瓶含人凝血因子Ⅷ的效价可有50、100、200、300、400IU五种，制品的效价应标示在瓶签及包装上。成品检定2.1抽样每批制品应抽样作全面质量检定，不同机柜冻干的制品分别抽样做无菌试验和水分测定。2.2　物理检查2.2.1　外观应为乳白色疏松体，无融化迹象。溶解后溶液澄清或轻微乳光，允许有微量细小蛋白颗粒。2.2.2　真空度以高频火花真空测定器检测，瓶内应出现蓝紫色辉光。2.2.3　溶解时间从冰箱取出的制品应先平衡至25～37℃，然后按瓶签标示量加入适量30～37℃灭菌注射用水，使其每ml含4IU。制品应于30分钟内溶解。2.3　化学检定按《生物制品化学检定规程》进行。2.3.1　水分水分含量应≤3%（g/g）。2.3.2pH值取2.2.3项下溶解在20±2℃测定，pH值应为6.8～7.6。2.3.3　钠离子测定取2.2.3　项下溶液测定，钠离子含量应≤160mmol/L。2.3.4枸橼酸离子测定取2.2.3项下溶液测定，如加枸橼酸钠作稳定剂，其枸橼酸离子含量应≤25mmol/L。2.4　效价测定取2.2.3项下溶液用一步或二步法（见附录）进行测定，每瓶所含人凝血因子Ⅷ的效价应不低于标示量的80%。2.5　比活性每mg蛋白质所含人凝血因子Ⅷ的效价应≥0.25IU。2.6HBsAg检测用敏感性为1ng/ml以下的试剂盒检测，应为阴性。2.7　抗HCV检测用敏感的方法检测，应为阴性。2.8抗HIV-1及2检测用敏感的方法检测，应为阴性。2.9　无菌试验样品溶解后按《生物制品无菌试验规程》进行。2.10　安全试验2.10.1　豚鼠试验用体重300～400g健康豚鼠2只，每只腹腔注射检品15IU，注射后半小时内动物不应有明显的异常反应，观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠复试一次，判定标准同前。2.10.2　小白鼠试验用体重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射检品1.5IU，半小时内动物不应有明显的异常反应，继续观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用10只小白鼠复试一次，判定标准同前。2.11　热原质试验按《生物制品热原质试验规程》进行，注射剂量按家兔体重注射10IU/kg。判定标准按该4.2项要求进行。2.12　鉴别试验用免疫双扩散法，仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛血清不产生沉淀线。2.13根据病毒灭活方法，必要时应增加相应的检定项目。保存与效期应严格保存于10℃以下避光干燥处，运输期间亦应冷藏。效期自效价检定合格之日起为2年。人凝血因子Ⅷ效价测定（一步法）试剂1.1样品稀释液：取1容积的3.8%枸橼酸钠液加入5容积咪唑缓冲液。1.1.1　咪唑缓冲液称0.68g咪唑和1.17g氯化钠溶于100ml蒸馏水中，加入42.2ml　0.1mol/L盐酸