欧洲花楸细胞悬浮培养生长动力学的研究.pdfVIP

欧洲花楸细胞悬浮培养生长动力学研究 肖文娟 杨光 黄蕾 郭兰萍 中国中医科学院中药研究所，北京 100700 摘要：目的:用数学建模模拟欧洲花楸悬浮细胞的增殖情况，研究欧洲花楸悬浮细胞生长动力学参数。方法: 测定欧洲花楸悬浮细胞生物量及细胞悬浮液的pH值的变化。利用细胞的鲜重和干重值来对欧洲花楸悬浮细胞的进行 生长曲线拟合。结果:欧洲花楸悬浮细胞液的pH值随着培养时间的增加而越来越大。在对细胞鲜重及干重的拟合中 得到，Logistic模型能够描述欧洲花楸悬浮细胞生长曲线的变化。对拟合得到的函数求一阶及二阶导数，得到了欧洲 花楸悬浮细胞的生长速率及生长加速度变化曲线。结论：通过对欧洲花楸悬浮细胞生长特性的研究，得到了欧洲花 楸悬浮细胞的生长函数符合logistic曲线，该函数为f(x)=5.044/(1+23.34*exp(-0.3887*x))，细胞在14d时进入增长平 台期，在8d时生长速率达到最大，在细胞生长至第5d时可添加诱导子进行处理。 关键词:欧洲花楸悬浮细胞；数学建模；Logistic函数模型；细胞悬浮液pH值 3．4细胞生长曲线建模方法 根据欧洲花楸悬浮细胞在培养过程中生长的规律构造细胞生长曲线，构建logistic、Gompcrtz 。 数中求得细胞最大增长速度及加速度参数， 3．5细胞悬浮液pH值测定 细胞悬浮液DH值采用分析型酸度计直接测定。 3．6欧洲花楸悬浮细胞中次生代谢产物的提取和检测方法 将收获的细胞用15mL甲醇在研钵中研碎，使用滤纸和漏斗将滤液过滤到鸡心瓶中，过滤后的 细胞残渣再用10mL甲醇提取一次，合并滤液，将鸡，心瓶置于旋转蒸发仪上浓缩至干。培养基用15mL 乙酸乙酯萃取两次，用分液漏斗分离，将乙酸乙酯层转移至鸡心瓶中，置于旋转蒸发仪上浓缩至干， 之后用乙酸乙酯定容至lmL。 检测。 · column；流动相为水(0．1％甲酸)：甲醇(50： HPLC测定条件为：4．6150mmCl8(5岬№verse 50)流速0．7mL／min；全波长紫外检测。 4结果 4．1欧洲花楸悬浮细胞液pH值的变化曲线 欧洲花楸细胞悬浮液pH值的变化数据见表l、图l。由图1可知，在正常培养条件下，细胞悬 浮液的pH值随着培养时间的延长而增大。细胞培养基初始pH值为4．14，在细胞继代培养ld后， 时，pH值变化较之前迅速。 以上实验结果表明，当生长时间17d时，细胞悬浮液的pH值6；当生长时间17d时，细胞悬 浮液的pH值6。由细胞生长曲线可知，在17d之后，细胞处于生长稳定期，说明在pH值6时， 不适宜细胞生长。欧洲花楸悬浮细胞当生长日期lad时，细胞悬浮液pH值6．0。细胞悬浮液的pH 随着培养时间的增加而逐渐增大，最后导致培养基不适合细胞生长。 、’’-’b1～q巾、、oo●O巾●●母巾 取样时问td) 图1欧洲花楸悬浮细胞液pH值变化曲线 4．2欧洲花橄悬浮细胞的生长曲线变化 欧洲花楸悬浮细胞在正常培养条件下生长20d时细胞生物量的变化结果见表l、图2及图3。从 图2、图3可以看到，欧洲花楸悬浮细胞鲜重和干重的生长曲线均为S型。由图3可知，细胞在1．5d 时，细胞生物量的增加较慢：在5．14d时，细胞鲜重快速增加；在14d之后，细胞鲜重量下降：在 17—20d时，细胞鲜重渐趋稳定，此时细胞进入生长稳定期。在14d时，细胞鲜重量达到最大值，为 5．299／瓶，是初始接种量的8．8倍。由图4可知，细胞生长的动力学特性和细胞鲜重生长曲线是一致 的。细胞生物量达到最大值的时间不同，细胞干重在16d时，达到最大值，为0．49／瓶。 以上实验结果表明，欧洲花楸悬浮细胞培养的动力学特性为。在继代后的0．5d，是细胞的延滞 的鲜重达到最大值，即细胞在14d之前生长所需的营养物质及生长空间是充足的，此时细胞增量是 不受环境因子限制的。欧洲花楸悬浮细胞在生长至14d时，是细胞的最佳收获期。 336