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欧洲花楸细胞悬浮培养生长动力学研究
肖文娟 杨光 黄蕾 郭兰萍
中国中医科学院中药研究所,北京 100700
摘要:目的:用数学建模模拟欧洲花楸悬浮细胞的增殖情况,研究欧洲花楸悬浮细胞生长动力学参数。方法:
测定欧洲花楸悬浮细胞生物量及细胞悬浮液的pH值的变化。利用细胞的鲜重和干重值来对欧洲花楸悬浮细胞的进行
生长曲线拟合。结果:欧洲花楸悬浮细胞液的pH值随着培养时间的增加而越来越大。在对细胞鲜重及干重的拟合中
得到,Logistic模型能够描述欧洲花楸悬浮细胞生长曲线的变化。对拟合得到的函数求一阶及二阶导数,得到了欧洲
花楸悬浮细胞的生长速率及生长加速度变化曲线。结论:通过对欧洲花楸悬浮细胞生长特性的研究,得到了欧洲花
楸悬浮细胞的生长函数符合logistic曲线,该函数为f(x)=5.044/(1+23.34*exp(-0.3887*x)),细胞在14d时进入增长平
台期,在8d时生长速率达到最大,在细胞生长至第5d时可添加诱导子进行处理。
关键词:欧洲花楸悬浮细胞;数学建模;Logistic函数模型;细胞悬浮液pH值
3.4细胞生长曲线建模方法
根据欧洲花楸悬浮细胞在培养过程中生长的规律构造细胞生长曲线,构建logistic、Gompcrtz
。
数中求得细胞最大增长速度及加速度参数,
3.5细胞悬浮液pH值测定
细胞悬浮液DH值采用分析型酸度计直接测定。
3.6欧洲花楸悬浮细胞中次生代谢产物的提取和检测方法
将收获的细胞用15mL甲醇在研钵中研碎,使用滤纸和漏斗将滤液过滤到鸡心瓶中,过滤后的
细胞残渣再用10mL甲醇提取一次,合并滤液,将鸡,心瓶置于旋转蒸发仪上浓缩至干。培养基用15mL
乙酸乙酯萃取两次,用分液漏斗分离,将乙酸乙酯层转移至鸡心瓶中,置于旋转蒸发仪上浓缩至干,
之后用乙酸乙酯定容至lmL。
检测。 ·
column;流动相为水(0.1%甲酸):甲醇(50:
HPLC测定条件为:4.6150mmCl8(5岬№verse
50)流速0.7mL/min;全波长紫外检测。
4结果
4.1欧洲花楸悬浮细胞液pH值的变化曲线
欧洲花楸细胞悬浮液pH值的变化数据见表l、图l。由图1可知,在正常培养条件下,细胞悬
浮液的pH值随着培养时间的延长而增大。细胞培养基初始pH值为4.14,在细胞继代培养ld后,
时,pH值变化较之前迅速。
以上实验结果表明,当生长时间17d时,细胞悬浮液的pH值6;当生长时间17d时,细胞悬
浮液的pH值6。由细胞生长曲线可知,在17d之后,细胞处于生长稳定期,说明在pH值6时,
不适宜细胞生长。欧洲花楸悬浮细胞当生长日期lad时,细胞悬浮液pH值6.0。细胞悬浮液的pH
随着培养时间的增加而逐渐增大,最后导致培养基不适合细胞生长。
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取样时问td)
图1欧洲花楸悬浮细胞液pH值变化曲线
4.2欧洲花橄悬浮细胞的生长曲线变化
欧洲花楸悬浮细胞在正常培养条件下生长20d时细胞生物量的变化结果见表l、图2及图3。从
图2、图3可以看到,欧洲花楸悬浮细胞鲜重和干重的生长曲线均为S型。由图3可知,细胞在1.5d
时,细胞生物量的增加较慢:在5.14d时,细胞鲜重快速增加;在14d之后,细胞鲜重量下降:在
17—20d时,细胞鲜重渐趋稳定,此时细胞进入生长稳定期。在14d时,细胞鲜重量达到最大值,为
5.299/瓶,是初始接种量的8.8倍。由图4可知,细胞生长的动力学特性和细胞鲜重生长曲线是一致
的。细胞生物量达到最大值的时间不同,细胞干重在16d时,达到最大值,为0.49/瓶。
以上实验结果表明,欧洲花楸悬浮细胞培养的动力学特性为。在继代后的0.5d,是细胞的延滞
的鲜重达到最大值,即细胞在14d之前生长所需的营养物质及生长空间是充足的,此时细胞增量是
不受环境因子限制的。欧洲花楸悬浮细胞在生长至14d时,是细胞的最佳收获期。
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