隐花色素CRY2基因片段克隆及RNAi植物表达载体的构建.pdfVIP

分子植物育种，2008年，第6卷，第6期，第 1182一l186页 MolecularPlantBreeding，2008，Vo1．6，No．6，1182—1186 新思路、新技术、新方法 NovelThinking Technology 隐花色素CRY2基因片段克隆及RNAi植物表达载体的构建 周波 孙梅 阎淑滑 李玉花 东北林业大学花卉生物工程研究所，哈尔滨，150040 通讯作者。lyhshen@126．COITI 摘 要 隐花色素是植物向光反应的主要的光受体，介导蓝光 ／近紫外光调控的反应。在拟南芥中CRY2调 节去黄化反应并控制开化时问。我们根据在 GenBank中已经发表的拟南芥(NM 100320)、中国大 白菜 (AV176689)、油菜(AJ889779)CRY2基因的cDNA保守序列设计并合成同源引物。通过RT—PCR方法从 津‘‘ 田”芜菁(BrassicarapaL．subsp．rapa“Tsuda’，)总RNA中扩增出CRY2基因的eDNA部分片段，采用gateway 技术中的BP反应将其克隆到pDONR221中。测序表明，该片段与拟南芥具有87％的同源性，与油菜和中国 大A菜的同源性达97％以上。采用gateway技术中的LR反应，以植物表达载体pH7GWIWG2(I)为基础，构 建了由组成型启动子 35S调控的CR