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淋病奈瑟球菌药敏检测及耐药分子机理研究
江苏省常州市妇幼保健医院(213003)黄瑞萍郑亚芬承晓京 汤韧
产青霉素酶淋病奈瑟菌(PPNG)，耐四环素淋病糖发酵试验证实。挑取T-M培养基纯菌落4～5个
制备菌悬液做药敏检测，另挑取T-M培养基纯菌落
奈瑟菌(TRNG)，耐环丙沙星淋病奈瑟球菌(CRNG)
等3种耐药菌株已屡见报道，耐多药(MDR)的淋病1～2个置于200m生理盐水中，一70℃保存待做
奈瑟菌(Ng)国内也存在，但经检索：迄今为止国内 PCR。
MDR表型与基因型联合检测研究，国内 6．纸片扩散法药敏实验：按美国国家临床实验
外未见Ng
室标准化委员会(NCCLS)标准参照文献进行。
也无NgTEM．1基因和penA基因分析研究报道，为此
0t30
我们对分离自常州地区的№流行株以纸片扩散法 7．PCR检测：菌株处理：样本10r／min离心
5min，吸弃上清液。加100
进行了青霉素、四环素、环丙沙星、壮观霉素4种药 m浓度为400t唱,／na蛋
白酶K溶液(为0．5％的非离子去污剂NP40配制)
物的敏感性检测，以套式PCR及PCR技术进行
000
混匀，置55℃保温1h，改置95℃保温10min，15
TEM—l基因、7retM基囚检测和gyrA基因PCR加DNA
r／min离心30
测序分析，部分菌株做了penA基因PCR加DNA测 S，上清液即为模板液。TEM一1基因检
序分析。
及penA基因检测均为PCR法。完全按说明书进行
材料和方法 检测。
1．菌株来源：87株Ng均为2001年8月一2002
扩增产物的测序由无锡市克隆遗传技术研究所完
年8月分离自常州地区淋病患者的病灶部。
成。
Martin培养基购自常州金坛
2．培养基：Thayer
欣迪公司，为英国Oxoid公司产品。 结 果
3．药敏纸片：青霉素、四环素、环丙沙星、壮观
1．常州地区Ng流行株对青霉素、四环素、环丙
霉素药敏纸片均购自杭州天和生物制品有限公司。
沙星、壮观霉素药物敏感性检测结果，见表1。
4．PCR试剂：购自无锡市克隆遗传技术研究
所。分别根据美国Genbank基因库的Ng有关耐药
基因自行设计寡核苷酸引物和优化反应体系。 表1 常州地区Ng流行株对青霉素、四环素、
环丙沙星、壮观霉素药物敏感性检测结果
TEM．1基因外套引物P1为5-AGT，TAT，CTA，CAC，
GAC，GG-3’、P2为5-GGC，GTA，CTA，TIC，ACT，CTo
3’；内套引物P3为5-AGT，TAT，CTA，CAC，GAC，∞
3’、P4为5-TIG，AAG，AAG，qTG，CAA，ACG，GCC
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