体外诱导培养健康成人外周血单核细胞源树突状细胞.pdfVIP

维普资讯 第 42卷 第 3期 哈尔滨医科大学学报 V01．42．No．3 2008年 6月 JOURNAL OFHARBIN MEDICALUNIVERSITY Jun．，2008 243 体外诱导培养健康成人外周血 单核细胞源树突状细胞 陈 月 ，岳化葵 ，邹红岩 ，方爱萍 (1．暨南大学第二临床医院，深圳市人民医院检验医学部 ，广东 深圳 518020 2，深圳市血液中心 输血研究所，广东 深圳 518035) [摘要] 目的 建立在体外从健康成人外周血单核细胞 (Mo)诱导培养成熟的树突状细胞 (DC)的方法。方法 采 用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞 (PBMC)，再以黏附法分离出Mo，加入重组人粒细胞．巨噬 细胞集落刺激因子(rhGM．CSF)和重组人白细胞介素．4(rhIL-4)体外培养 12天，并于培养第 6天加入重组人肿瘤坏 死因子 (rh a)共同培养 ，于倒置显微镜下观察细胞的形态 ，以流式细胞仪检测培养 6、9、12天 DC表面 CDla、 CD83、CD86和MHC—DR的表达水平，用MTF法测定DC刺激同种异体 T细胞增殖的能力，进行比较分析。结果 Mo 经rhGM．CSF+rhIL--4诱导培养6d后 ，细胞成簇 ，表型为CDla53．2％、CD8313．6％、CD8665，5％、MHC．DR75，4％； ，INF-a诱导后，即培养第9d，细胞表型为CDla62．1％、CD8373．5％、CD8692，3％、MHC—DR98．4％，激发初始T细胞 增殖的能力最强。结论 rhGM—CSF+rhlL-4诱导 Mo6d，可获得大量不成熟的DC，该体系有利于DC扩增 ；加入 a，培养第 9d，DC成熟度最高，适合于临床免疫治疗。 [关键词] 树突状细胞；单核细胞；细胞因子 ；CD分子 [中图分类号]R392．1 [文献标识码]A [文章编号]1000—1905(2008)03—0243—03 Generationofhealthyhumanperipheralbloodmonocytederiveddendriticcell／nvitro CHEN Yue，YUE Hua—kui，ZOU Hong—yan，etal (DepartmentofLaboratoryMedicine，ShenzhenPeople’sHospital，TheSecondAffiliatedHospital of ，nUnive~ity，Shenzhen518020，China) Abstract：0bjective Tofindawaybywhichdendriticcells(DC)fromhealthyhumanmonocyteinperipher— albl0odmightbeinducedtobematured．M ethods Mononuclearcellswereisolatedfrom peripheralbl0od0f healhhyhmuna byFicoll—Hypaquedensitygradientseparation，nadhtenmonocytes(Mo)werepurifiedthrough adhensiveness．DCswereobtainedaftera 12 dayincubationofmonocyteswithhtemediaconatininggranulo． cyte／macrophagecolonystimulatingfactor(GM—CSF)，interleukin一4(IL一