体外构建喹诺酮耐药肺炎克雷伯菌模型及gyrA、parC基因突变与耐药性关系.pdfVIP

中华生物医学工程杂志2008年 10月第 14卷第 5期 ChinJBiomedEng，October2008，Vo1．14，No．5 · 341 · · 论 著 · 体外构建喹诺酮耐药肺炎克雷伯菌模型 及 gyrA、parC基 因突变与耐药性关系 叶晓光 李永春 王若伦 【摘要】 目的 体外构建喹诺酮耐药肺炎克雷伯菌模型并研究其gyrA、parC基因突变与喹诺酮 耐药的关系。方法 运用亚抑菌浓度的左旋氧氟沙星与肺炎克雷伯菌在培养基 中共培养，并倍比增 加诱导药物的浓度，直至肺炎克雷伯菌能够在含高浓度的左旋氧氟沙星培养基上 良好生长。收集耐 药菌株 ，用 PCR扩增和DNA测序法检测 gyrA、parC基因喹诺酮耐药决定区域 (QRDR)的突变情况。 结果 体外成功构建喹诺酮高浓度耐药肺炎克雷伯菌模型，所有耐药菌株 QRDR均发生了变异，绝大 部分为 gyrA和parC双重突变。gyrA基因以Ser83、Asp87突变为主，Ser83一Ile，Asp87一Arg、Gly，也有 菌株86位氨基酸发生了突变 ，由rryr86一ser。几乎所有菌株 parC基因80位氨基酸的突变均为Ser80 一Ile。结论 长期低浓度用药可以诱导喹诺酮耐药性的产生。QRDR突变与喹诺酮耐药性有关，gyrA 及parC的双重突变可以导致高水平耐药 ，同时可能存在其他耐药机制。 【关键词】 克雷伯菌，肺炎 ； 喹诺酮类 ； 药物耐受性 ； DNA旋转酶； DNA拓扑异构酶1V； 喹诺酮耐药决定区域 Construction ofquinoloneresistantmodelofKlebsiellapneumoniaein vitroand theassociation of themutationsofgyrA andparC genewithresistance YEXiao—guan，LIYong—chun，WANGRuo—lun ． DepartmentofInfectiousDiseases，theSecondAffiliatedHospital，GuangzhouMedicalCollege，Guangzhou 510260，China Correspondingauthor：WANGRuo—lun，Email：Wangruolun@ 126．corn 【Abstract】 Objective ToconstructquinoloneresistantmodelofKlebsiellapneumoniaeinvitroand investigatethe association ofmutationsofgyrA and parC gene with thequinolone resistance．M ethods Klebsiallapneumoniaewereisolated and cultured with levofloxacin atsubinhibitoryconcentration in media first，thentheinduceddurgwasincreasedatdoubleconcentrationuntilklebsiallapneumoniaegrewwellonthe platecontaininghighconcentrationoflevofloxacin．Resistantstrainswereharvestedanddetectedformutations ofquinoloneresistancedeterminingregions(QRDR)ingyrAgeneandparCgenebyPCRamplificationand DNA sequence．Results QuinoloneresistantmodelofKlebsiellapneumoniaeinvitrowasconstructed successfullyathighconcentration．AllthestrainshadmutationsattheQRDR，mostofwhichhaddouble mutationsofbothgyrA andparC．MutationsofgyrA relatedtoquinoloneresistanceprimarily includedSer83 andAsp8