免疫组化染色中表面活性剂的应用.pdfVIP

维普资讯 四 川 解 剖 学 杂 志 2003年 第 11卷 第 4期 ·51 · · 技术 交流 · 免疫组化染色 中表面活性剂 的应用 陈晓字 贾雪梅 王惠珠 陈晓蓉 (安徽 医科大学组织胚胎学教研 室 安徽 舍肥 230032) 组织经福 尔马林液 固定 ，大量抗 原决定簇被封 2 结果 闭，为 了获得满意 的结果 ，常用 的方法是对组织切片 用 TBS+TritonX--100混合液和 TBS+Tween 进行抗原修复 。而表面活性剂 Tween一20和 Triton -- 20混合液稀释一抗与用 TBS稀释液抗体相 比，阳 X一100的合理应用 ，可 以提高免疫组化 阳性率 以及 性率 明显增加 ，非特异性着色浅 ，背景清 晰 。(图 1， 背景 的清 晰度 ，现报道如下 。 2) 1 材料 与方法 1．1 标本 10例 SD大 鼠空肠 (近十二指肠升 部)标 本 ，修 剪 为 15mm × 15mm。所 有 组织 均用 10 福 尔马林液 固定 、脱水 、透 明、常规石蜡包埋 ， 6Mm厚连续切 片。 1．2 试剂 P物质 (SP)、降 钙素 基 因相 关肽 (CGRP)、血管活性肠肽 (VIP)等抗体为 Sigma公司 产 品，免疫组化 ABC试剂购于武汉博士德生物技术 有限公司。Tween一20、TritonX一 100购 自南京生 兴生物技术 有限公 司。 1．3 方法 1．3．1 抗体稀释用 pH值 7．2Tris—Hcl缓冲 液 100ml+ 8．77gNaC1，加 双 蒸 水 至 1000ml，配 制 图 1 空肠肌间神经丛 图 2 空肠 肌间神经元 Tris缓 冲 生 理 盐 水 (即 TBS 950ml+ Tween一20 (TBS+Tritonx一100) 丛 (TBS稀释 ) 50ml、Tris—Hcl缓 冲液 950ml+TritonX．100)50ml 二种液体分别作为三种抗体稀释液。工作浓度为 SP 3 讨论 1：2000；CGRP 1：1000；V 1P 1：1000 表面活性剂具有极性分子与非极性分子相结合 1．3．2 免疫组化 ABC法石蜡切 片常规脱蜡至 的亲水基 团和亲油基 团，能 降低物质 界面张力 ，增加 水 ，3 HzOz阻断 内源性 过氧化 物 20min，TBS洗 细胞的渗透性 ，提高液体的渗透力，并使染色均匀 ，起 5min3次；高压锅抗原修复，加封闭羊血清，37℃，20 助染剂 的作用u 。 min；吹去封 闭血清 ，分别滴加用 2种不 同稀释液配 制 的一抗工 作液和 1张仅滴加 TBS作 阴性对 照 ， Tris全名为三羟 甲基氨基 甲烷 ，主要用于配制 37℃孵 育 2h，4~C冰箱过夜 ；生物素化二抗工作液 ， TBS。TBS为 Tris缓冲生理盐水 ，常用于漂洗标本 ， 37℃孵育 1小时，TSS洗 5min3次 ；ABC复合物工作 常用于免疫酶技术 。Tween一20全名为聚氧 乙烯一 液 ，37℃孵育 1小 时 ，TBS洗 5min3次 ；DAB(1：50稀 20山梨糖醇酐单月桂酸酯 ，Tritonx一 100全名为聚 释 ，武汉博士德)显色