高效液相色谱法快速测定降血压肽血管紧张素转换酶抑制活性.pdfVIP

高效液相色谱法快速测定降血压肽的血管 紧张素转换酶抑制活性’ 姜瞻梅，田 波，吴 刚，霍贵成 (东北农业大学乳品科学教育部重点实验室．东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨，150030) 摘要建立了体外快速测定阵血压肽的血管紧张素转换酶抑制活性的高效寝相色谱分析方法。以马尿酰组 氨酰亮氨酸(HHL)为反应底物，血管紧张素转换酶(AcE)为催化剂，反应所生成的马屎酸为测定指标，未加酶 3．9×150mm 抑制荆的反应为空自对照。使用symmetryCl8分析型色谱柱(5pm r)，柱温25℃，流动相A为乙 mL／min，检测 腈(舍o．05“三氟乙酸)，流动相B为超纯水(合o．05“三氟乙酸)，采用梯度冼脱方式，流速o，8 波长228 诚方法具有照好的准确性和重现性。对马尿酸的回牧率为93．23％～100．25％。高鼓液相色谱法和紫外比色法 对血管紧张素转换酶抑制活性无显著差异(P0．05)。结果显示，高效液相色谱法具有检测快速、操作简便、是 敏度高等优点，为降血压产品的研制提供了简便可靠的检测手段。 关键词 高效液相色谱法，血管紧张素转换酶抑制活性，马屎酸 I—convertin— 血管紧张素转换酶(a“giotensin 1持料与麦法 genzyme，AcE)在调节体内血压中发挥着重要作用。 ACE催化血管紧张素I转变为具有升高血压作用的1．1试验材料 物质血管紧张素Ⅱ；同时AcE将具有降压作用的物 x 质舒缓激肽降解，使之失去降压作用o]。 公司产品；symmetryc18分析型色谱柱(5pm3．9 降血压肽对AcE的亲合度比血管紧张素I或舒 张激肽还要强，而且也较不易从ACE结合区释放， 酸(色谱纯)德国MERcK公司；马尿酸、硼酸、硼砂、 从而阻碍AcE催化血管紧张素l水解成为血管紧张NaCl均为分析纯试剂。降血压肽产品由乳品科学教 素II，以及催化舒缓激肽水解成为失活片段的2种生 育部重点实验室提供。 化反应过程，起降血压作用[2’3]。 1．2试验仪器 在降血压肽的活性检测体系中，主要包括体外检 全自动高效液相色谱仪，美国waters公司；x 测(AcE抑制活性检测)和体内检测(动物试验检w一80A型旋涡混合器，上海医科大学仪器厂制造； 测)。由于时间、经费等原因，不可能随时对功效成分 进行动物试验，所以建立一种简便可靠的体外活性检 测方法尤为重要。1971年，Cushm丑n和Cheung建 立了紫外分光光度法测定AcE抑制活性”o，Naka— 特勒一托利多仪器(上海)有限公司；不锈钢电热恒温 mura等03人在该方法的基础上加以修改后，但该方 水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司。 法应存在操作步骤较繁琐，分析时间较长，对实验操 1．3色谱条件 作要求甚高，实验易产生误差等缺点，因此，需要建立 色谱柱：symmetryc18分析型色谱柱(5“m 高效、简便的测定方法。本研究尝试采用高效液相色 3．9×150mm) 谱(HPLc)直接定量快速测定降血压肽的AcE抑制 检测波长；228nm；流速：o．8mL／min；流动相 活性。 A：水(含0．05％三氟乙酸)；流动相B：乙腈(含