微孔板蛋白质芯片技术应用于单克隆抗体分型研究.pdfVIP

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 2007 , 27 ( 6) : 56 ～60 技术与方法 微孔板蛋白质芯片技术应用于单克隆抗体 分型研究 1 1 1 1 2 1 1 1 宋 　凯 　周佳菁 　叶　赛 　彭海林 　王升年 　肖华胜 　赵国屏 　张庆华 ( 1 生物芯片上海国家工程研究中心 /上海生物芯片有限公司　上海 　20 1203) (2 上海华冠生物芯片有限公司　上海 　20 1203) 摘要 　设计与构建了可用于单克隆抗体分型鉴定的微孔板蛋白质芯片 ,利用该芯片进行了 12 株 单克隆抗体和 2 种多克隆抗体的分型鉴定 ,并与 EL ISA 方法进行了对比。结果表明 ,蛋白质芯片 方法对单克隆抗体和多克隆抗体进行鉴定的结果 ,与 EL ISA 方法进行鉴定的结果一致 ;与 EL ISA 方法相比,蛋白质芯片的方法降低了试剂与样品的用量 ,缩短了工作时间 ,提高了工作效率 。对 于高通量的单克隆抗体制备体系 ,单克隆抗体分型蛋白质芯片是一种敏感 、快捷的分型鉴定工 具 。 关键词 　蛋白质芯片 　单克隆抗体 　分型 中图分类号 　Q 816 　　抗体在有关蛋白质的功能研究、免疫学研究和药物 单克隆抗体分型芯片能够快速正确进行单克隆抗体的 靶点的发现以及抗体药物的研制方面有极其重要的应 分型 , 降低了试剂与样品用量 ,提高了检测效率 。 用 [ 1～5 ] ,因此高通量抗体制备技术体系的建立就成为研 [ 6～8 ] 1　材料与方法 究热点 。各种高通量技术制备的单克隆抗体都需要 进行分型检测 , 目前普遍使用的方法为 EL ISA 方法 ,但是 1. 1　实验材料与仪器 EL ISA 检测工作量大 ,试剂与样品需求多。因此需要一 1. 1. 1　实验材料 　12 株单克隆抗体与 2 种多克隆抗 种快速 、灵敏的方法进行单克隆抗体的分型。 体为研究室前期制备 ,单克隆抗体使用的为细胞培液 , 　　蛋白质芯片是基于抗原和抗体特异性结合的原 检测时用 pH7. 0 , 50mmol/L PB S按照一定比例进行稀 理 ,利用微点阵技术将多种蛋白质结合在固相基质上 , 释 ,多克隆抗体为制备的小鼠抗血清 ,检测时用 pH7. 0 , 达到一次实验同时分析多个生物标本或检测多种指标 50mmol/L PB S按照 1 ∶2000 稀释 。 的目的[ 9 ] 。本研究将微孔板蛋白质芯片技术应用于单 1. 1. 2 　试剂与仪器 　单克隆抗体分型用抗体试剂 克隆抗体的分型检测 , 设计与构建了单克隆抗体分型 ( ) ( ) ISO 2 、辣根过氧化物酶 HRP 标记的羊抗鼠单克隆 微孔板蛋白质芯片 ,对本研究室制备的 12 株单克隆抗 ( ) ( ) 抗体 A99 17 、四甲基联苯胺显色试剂 TMB , T0565 体与 2 种多克隆抗体进行了检测 , 并与传统的 EL ISA 均