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组织工程中蛋白高聚物法合成水凝胶 Maya Gonen-Wadmany, Liat Oss-Ronen, Dror Seliktar 摘要 胶原蛋白，纤维蛋白和白蛋白，因为生物相容性，生物可降解性。生物蛋白为基础的生物材料的主要缺点是对他和生物降解性能的控制。我们的实验室一直在发展无细胞毒性蛋白质交联技术可调谐特性的新蛋白质为基础的生物材料。我们蛋白质聚合物复合物聚乙二醇）和胶原蛋白，纤维蛋白或蛋白仿生支架水凝胶的形成和装配。PEG这些蛋白质SDS - PAGE和凝胶网络的聚合一个反应。三个水凝胶材料的膨胀特性的差异，聚乙二醇蛋白质成分关系。聚乙二和纤维蛋白原凝胶细胞粘附和蛋白退化，水凝胶网络内的3 - D扩散和迁移。聚乙二醇白蛋白水凝胶没有任何已知的白蛋白骨干细胞粘附。尽管聚乙二醇化水凝胶纤维蛋白原生物组成和结构不同，每个细胞内物质的迁移率差异不–D环境可以支持细胞增殖以及有效的重组直到转变成多层次的组织和器官[4]。出于这个原因，孔径的大小，透气性，材料表面特性对于巧妙地这个重塑都很重要[5,6]。在同一时间，材料的细胞外基质骨干可以指导细胞进行重要的表型转变[7]。 使用外源性蛋白或重组蛋白，如胶原蛋白或纤维蛋白作为组织工程支架会有一些缺陷，其中就包括聚合网状结构的物理性质和生物降解。举例来说，胶原蛋白凝胶制成的纤维网络，具有较差的机械强度和足够的生理组织孔隙率。细纤维与孔洞结构相结合的交叉结构使得蛋白胡子古干容易从周围宿主组织或细胞培养系统中向四周西游扩散。这往往存在于细胞分泌的失控或过早恶化的蛋白酶中[3,8,9]。但凝胶的结构不完善且蛋白易水解，与自然组织相比仍有许多工作有待从实际的组织工程生物支架系统中吸取经验。 有一系列用于改善重组蛋白水凝胶以防止它们的理化性质迅速退化的技术。改进蛋白物理性质的技术是以包括醛，碳二亚胺和氮羟基琥珀酰亚胺（NHS）[10,11]等的共价交联为基础的。许多交互相联的物理稳定和酶感受性改善，通过[3,12]。胶原蛋白和纤维蛋白也可通过冷冻干燥以增加拉伸强度和蛋白网络的系数[13-15]。然而，冷冻干燥就必须预先进行冷冻步骤，这样就降低了了细胞凝胶聚合物存在的可能性，但也失去了在原位固定的好处。 可以聚乙二醇屏蔽支架蛋白的蛋白质降解，聚乙二醇化可能是一个基于蛋白质的生物，无毒，无免疫原性，，并已美国FDA的临床[20].在支架设计中常见的蛋白质可以随时使用氨基聚乙二醇化修改骨干的蛋白质巯基，以产生蛋白质的共轭聚合物[21,22].聚乙二醇酶蛋白质的天然生物功能[20].在本次调查中，我们描述了蛋白质聚合物复合物的形成，并将其纳入组织工程仿生水凝胶支架。三种生物医学蛋白质，包括胶原蛋白，纤维蛋白（原），白蛋白聚乙二醇自由基聚合形成凝胶网络。在二维和三维的这三个生物材料平滑肌细胞（SMCs）进行了长达一个星期表征和测试记录和总结单元格的种子细胞重塑的可行性流动性。2.方法 2.1聚乙二醇二丙烯酸酯的合成 聚乙二醇二丙烯酸酯（PEG - DA）PEG-OH MW ? 10 kDa (Fluka, Buchs, Switzerland)作为起始原料的[30]。丙烯酰氯(Aldrich, Sleeze, Germany)最终产品是沉淀在冰冷的乙醚下真空干燥48小时核磁共振来验证端基转换验证最终产品的纯度。2.2.纤维蛋白原，白蛋白聚乙二醇 纤维蛋白原白蛋白的聚乙二醇根据Dikovsky等人一个聚乙二醇[18]。三（2 -羧乙基）膦盐酸盐（乙基-盐酸）（Sigma - Aldrich公司）被添加到150mm的7mg/m纤维蛋白原（Sigma - Aldrich公司）或牛血清白蛋白（MP的Biomedicals，俄亥俄，美国）溶液磷酸盐缓冲液（PBS）与8M的尿素（摩尔比为1.5:1或2:1乙基纤维蛋白原或白蛋白半胱氨酸，分别）。线性10 - kDa的- DA的蛋白质以4:1或2:1摩尔比PEG或白蛋白半胱氨酸纤维蛋白原反应3 h。该产品是聚乙二醇化蛋白质丙酮沉淀在PBS中含有尿素8007mg/ml的最终纤维蛋白原浓度和2/ml的最后白蛋白浓度。透析的蛋白产物在4 1C号对PBS为2个D（频谱，12 - 14 - kDaMW截止，加利福尼亚州，美国）。聚乙二醇化白蛋白浓缩至8/ml后冻干和重组。聚乙二醇化产品的特点已公布的协议[18]。2.3.胶原的聚乙二醇化 胶原蛋白（I型）是根据已公布的协议从鼠尾肌腱分离[23]。胶原蛋白的巯基化完成根据等人的协议使用succinimidylacetyl - thioacetate（SATA接口，皮尔斯，美国伊利诺州）[24]。简单地说，胶原蛋白与8M的尿素溶解在浓度5mg/ml的150毫米PBS里。SATA是在室温下反应2 h浓度0.075mg/ml的胶原蛋白