利用TAIL-PCR与RT-PCR技术克隆云芝植酸酶基因.pdfVIP

维普资讯 应用与环境生物学报 2006，12(5)：618～622 ChinJApplEnvironBiol=ISSN 1006-687X 利用 TAIL—PCR和 RT—PCR技术克隆云芝植酸酶基因 杨帆，4林俊芳，2苗灵凤 郭丽琼 2 (中国热带农业科学院热带作物生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室 海 口 571101) (。华南农业大学食品学院生物工程系 广州 510640) (右江民族医学院 广西百色 533000) (中国科学院成都生物研究所 成都 610041) 摘 要 从采绒革盖菌 (Corwlusversicolor，常被称为杂色云芝)中筛选到产植酸酶基因．根据植酸酶基因的保守序列设 计引物 P1、P2，从云芝中分离克隆植酸酶基因的片段．再在分离到的已知序列的5端和3端设计嵌套的特异引物 SP1、SP2、SP3和SP1、SP2、SP3，利用TAIL．PCR技术进行分离已知序列的侧翼序列．结合Blastn、ORF和Primer5． 0软件 ，在侧翼序列上设计特异引物P3、P4，最终从云芝中分离克隆到全长的植酸酶基因B4．再在B4序列的基础上设 计引物phyPrtl、phyPrt2，利用这两个引物通过RT．PCR技术从云芝中克隆到全长的植酸酶基因B5．通过分析，分离克 隆到的植酸酶基因可能是新的基因．图4参 12 关键词 云芝；植酸酶；TAIL·PCR；RT·PCR CLC Q785 ：Q949．329．7 CloningofPhytaseGenefrom CoriolusversicolorbyTAIL-PCR andRT-PCR YANGFan ，LINJunfang一，MIAO Lingfeng GUO Liqiong · (StateKeyLaboratoryofBoitechnologyofTropicalCrops，lnstitizeofTropcialBioscieneeandBiotechnology， ChineseAcademyofTropcialAgriculturalSciences，Haikou571101，China) (DepartmentofBiotechonolgy，CollegeofFoodScience，SouthChinaAgricultureUniversity，Guangzhou510640，China) (YoujiangMedcialCollegeforNationalities，Baise533000，Guangxi，China) (ChengduInstituteofBoilogy，ChineseAcademyofSceinces，Chengdu610041，China) Abstract Phytasegenewasscreenedfrom Coriolusversicolorinthisstudy．P1，P2weredesignedaccordingtotheconsensus sequenceofphytasegene．PhytasegenefragmentwasisolatedbyprimersP1，P2．Thenestedspecialprimers，SP1，SP2，SP3 andSP1，SP2 ，SP3 on the5一flankingand3 flankingontheknown sequenceweredesigned，andthentheflankingse· quencesofknownfragmentwereisolatedbyTAIL·PCR．T