利用废弃胚胎进行IVF实验室质控的可行性探讨.pdfVIP

thelabofstandardsand ofclinical 35％aStheassistantof quality outcomeforecasts． pregnancy words】Poorityembryo 【Key qual i control qualty 在IVF实验室质控中，除了应用精子上游试验之外，大多数还应用鼠胚培养 作为实验室质控的一个重要指标。但是由于其异源性很容易造成实验室的污染。 因此，急需寻找一个安全的来源来作为新的质控方法。在常规IVF和ICSI发育 形成的胚胎中，不适合冷冻的胚胎都被废弃。自报道利用这些废弃胚胎建立人类 胚胎干细胞系后‘11，有中心开始应用废弃胚胎进行囊胚培养的研究，囊胚形成率 大都在12—30％之间n’31。因此，本中心利用废弃胚胎进行囊胚培养研究，旨在摸 索出本中心的质控标准，为临床IVF质量稳定提供实验依据。 1．1研究对象 142 收集烟台毓璜顶医院生殖医学中心2009．3-2009．12月期间常规IVF 个患者的新鲜废弃胚胎396枚，包括①受精异常的无原核(OPN)②单个原核 (IPN)③3原核(3PN)④胚胎发育迟缓或停滞的胚胎(2PN)。本研究经本院伦 理委员会批准，所有患者均签署“自愿将胚胎用于科学研究的知情同意书’’。 1．2培养方法 1．2．i囊胚培养液采用VITROLIFE的Gl，G2序贯培养液、在35nlm的培养皿 中做25微升的微滴，覆盖矿物油。37℃、6％C02培养箱中平衡过夜。 1．2．2胚胎评分H1按Peter卵裂期胚胎评分系统结合本中心情况评估D3胚胎 质量，I级：胚胎卵裂球均匀规则，胞质均质透明，透明带完整，胚胎无或仅 有极少(5％)的碎片：II级：卵裂球形态轻度不均匀，胞浆折光性有轻微变化， 碎片20％，透明带完整：HI级：胚胎内碎片50％，其余卵裂球形态同II级，透明带 完整：Ⅳ级：胚胎内碎片50％，碎片外卵裂球具有活细胞特征，胞浆折光性有 较大改变，胞浆变黑、颗粒不均匀：将三级以下、停滞发育和异常受精的胚胎 行囊胚培养。 1．2．3囊胚培养及观察将第三天废弃胚胎在囊胚培养液中漂洗后，转移到新 鲜囊胚培养液微滴中培养至第5-6天，观察胚胎发育情况，根据Garnder囊胚 分级法对形成的囊胚进行分级畸1。先根据囊胚的扩张和孵出程度将囊胚分成1-6 级：1级，早期囊胚，囊胚腔体积囊胚总体积的一半：2级，囊胚腔体积囊 胚总体积的一半：3级，完全扩张囊胚，囊胚腔占据整个囊胚：4级，扩张后囊 胚，囊胚腔体积较早期囊胚明显扩大，透明带变薄：5级，正在孵化的囊胚， 囊胚正在从透明带破裂口孵出：6级，孵化出的囊胚，囊胚完全从透明带中脱 cell 出。3—6级囊胚需对内细胞团(innermass，ICM)和滋养外胚层细胞 细胞数目较少，结合较松散：C级， 细胞数目极少。TE评分：A级，细胞数目 多，囊胚四周均有细胞分布：B级，细胞数目较少， 上皮细胞较松散：C级， 细胞数目极少。 1．3统计学方法 采用SPSSl1．O统计软件包进行统计学分析，结果以百分率表示，率的比 较采用x2检验，检验标准取Q=O．05。 三、结果 2．1不同来源的胚胎囊胚形成情况 本实验共收集到142例患者的396个废弃胚胎，经序贯培养，形成98个 囊胚，囊胚形成率24．75％：孵出率34．69％。其中来源于OPN(晚期卵裂)的胚 胎囊胚形成率最高，2PN停滞和IPN胚胎次之，3PN最低。见表一 表一不同来源胚胎质量的囊胚形成情况 胚胎 胚胎数量 囊胚形成率(％) 孵出率(％) OPN(晚裂)101 50．5(51／101)47．06(24／51) 122 24．59(30／122)30(10／30) 2PN(迟缓／停滞) 1PN 41 17．07(7／41) 3PN