IL-27促进DC分化成熟及其作用机制的实验及研究.pdfVIP

IL-27促进DC分化成熟及其作用机制的实验研究 张 璁 刘丽华 单保恩 河北医科大学第四医院科研中心，河北省石家庄050011 目的：探讨IL-27对人外周血单个核细胞来源的树突状细胞(Dendriticcell，DC)分化成熟及其作用机制的影响。 方法：从正常健康人外周血中分离出单个核细胞，将其用GM-CSF，IL-4体外培养7d，并于培养第5天加入不同刺激因子分为 四组：Negative组、TNF-α组 （TNF-α：20ng/ml）、IL-27组(IL-27：20ng/ml)、TNF-α+IL-27组 （即双细胞因子组，TNF-α: 10ng/ml+IL-27：10ng/ml）。用倒置显微镜观察培养过程中DC的形态学变化，用流式细胞术检测DC表面共刺激分子CD1a、 CD83和CD80、CD86的双阳性率，以及表面粘附分子ICAM-1的表达水平，用MTS方法检测DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖 的能力，用ELISA的方法检测DC培养上清中细胞因子IL-12、IFN-γ的分泌水平，用Western-blot法检测DC信号通路蛋白 MAPKp38、P-STAT1和P-STAT3的含量。结果：光镜下，IL-27组和TNF-α+IL-27组诱导至第7天DC呈现典型的成熟形态学特 征；其DC表面CD1a和CD83、CD80和CD86的双阳性率显著增高，与TNF-α组相比具有统计学意义(P＜0.05)，粘附分子ICAM-1 的表达水平与Negative组相比也明显升高；随DC与T细胞比例增加，其刺激T细胞增殖的能力增强。当DC与T细胞比例在1∶10 时，TNF-α+IL-27组的刺激作用显著高于TNF-α组和IL-27组，结果具有统计学意义(P＜0.05)。TNF-α组、IL-27组和TNF-α+IL-27 组DC培养上清中细胞因子IL-12、IFN-γ的分泌水平较Negative组明显上调，其中TNF-α+IL-27组的分泌水平较TNF-α组仍具有 统计学意义。细胞内信号通路蛋白MAPKp38、P-STAT1和P-STAT3的水平较Negative组明显上调，以TNF-α+IL-27组更为明显。 结论：体外实验中，细胞因子IL-27可以直接或者协同TNF-α诱导DC成熟，刺激T淋巴细胞增殖功能增强，诱导产生更多的IL-12 和IFN-γ，其机制可能通过活化MAPKp38、P-STAT1、P-STAT3等信号通路。 白介素-27；树突状细胞；共刺激分子；趋化因子受体；信号通路 ResearchonthePromotabilityandtheMechanismsofIL-27on DifferentiationandMaturationofDendriticCells ZHANGCongLIULihuaSHANBaoen ResearchCenterofFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,ShiJiazhuang,HeibeiProvince,China 050011 ObjectiveToobservethestimulatoryeffectandmechanismofIL-27on thedifferentiationand maturationofhumanperipheralbloodmonocyte-derived dendriticcells (DC).MethodsMonocyteswere purifiedfromperipheralbloodofhealthyadultswithincubationofgranulocyte/macrophagecolonystimulating factor_ (GM-CSF) andinterleukin-4 (IL-4) for7days.TheDCdividedintofourgroupsbydifferent stimulatoryfactorsinthefifthday:Negativegroup,TNF-αgroup (TNF-α:20ng/ml),IL-27group (IL-27: 20ng/ml),TNF-α+IL-27group(co-cytokinesgroup,TNF-α:10ng/ml+IL-27∶10ng/ml).ThemorphousofDC wasobserve