纯化,测定植物中细胞分裂素的免疫亲与层析法与酶联免疫法.pdfVIP

维普资讯 ／ 蝣 ，‘私 ’ 植物生理学通讯 Plmtl肼 砒 孵 化怖 ]993，29(I)：56～59 纯化、测定植物中细胞分裂素的免疫亲和层析法和酶联免疫法 … … … 71 — — — — 一 — — ～ 一 ’’ The Immunoaffinity Chromatography and Indirect Competitive Enzyme LinkedlmmunoSorbentAssay forCytokinin YANG Zhon~HanCHEN n}Fu(m ㈣ 。，％ t ，m ’ 蛳 ． 1~0871) 近年来微量 的植物激素的定量分析方法 6d用不含福 氏佐荆 的免疫原连续免疫五 有很大发展 ，WeilerE 将放射免疫技术 引入 次，4个月后耳缘静脉取血．测定效价[，达 细胞分裂素的测定，许多研究者对植物激 素 到要求后强化免疫一次 ，一周后从免颈动脉 的免疫澳l定做了改进 “’。 细胞分裂素的 放血，收集 全部 血液，4℃冰 箱 过夜，离 心 酶联免疫吸附分析 (ELISA)具有灵敏度高、 (5000×g20min)收集血清备用 。抗血清滴度 特异性强、不需要昂贵设备、无放射性污染等 tZR为 1：64，iPA达 1：256以上。 优点，日益为各实验室采用。如何简化植物样 品的纯化步骤，提高检测的选择性和灵敏度 袁1免疫抗原和包被抗原的结台比 仍然是细胞分裂素免疫测定的限制因素 本 实验将抗玉米索棱苷抗体 (t—ZR—Ab)和抗异 戊烯基腺苷抗体 (iPAAb)与 Septlarose4B偶 联，制成细胞分裂素的免疫亲和吸附剂，用于 植物样品的分离、纯化．配台间接竞争酶联免 疫分析，使方法简便、快速，同时又有高灵敏 度和选择性，更适合于那些难以取得大量试 3 免疫球蛋 白(IgG)分离纯化 样材料的分析 3．1 根椐TijssenE 方法，抗血清用 33 饱 和硫酸铵沉淀免疫球蛋 白，重复 3次 ，获得初 材料与方法 步纯化 的IgG。 l 免疫原和包被抗原的制备 3．2 BSA-Sepharose4B亲和柱 的制备 ：用环 玉米素核苷及异戊烯基腺苷与牛血清 白 氧氯丙烷活化sepharose4B[，取 2mI环氧氯 蛋 白结台作为免疫抗原 上述两种细胞分裂 丙烷 ，9ml2mol／LNaOH，20ml56 (v／r) 素与卵清蛋 白的结 台物作为包被抗原 ，制备 参照WeflerEls]过碘酸盐氧化法 。结台比的测 收稿 199205—15 定按镓如涓等0方法 ．免疫抗原和包被抗原 缩写 OA：卵清蛋 白；_PA—Ab：抗异戊烯基腺苷抗体 ；P[A 的结台比见表 1。 BSA：异戊烯基腺苷和牛血清 白蛋 白的结合物 ；ipA 2 抗血清的制备 OA：异戊烯基腺苷和卵清蛋 白的结合物 ；OPD：邻苯 二胺 FPBST：加吐温 2O的氯化钠磷酸缓冲藏 }t—ZR— 新西兰家兔分成两组，分别用 250 含