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企 业 技 术 开 发 2009 年10 月 企企 业业 技技 术术 开开 发发 2009 年10 月 第28 卷 TECHNOLOGICAL DEVELOPMENT OF ENTERPRISE Oct.2009 蛋白质分离纯化和蛋白质结晶的研究方法 1 2 3 姚知渊 ,周浩鹏,周静舫 (1.临沂出入境检验检疫局,山东临沂 250100;2.菏泽学院,山东菏泽 274000; 3.华中农业大学食品科技学院,湖北武汉 430070) 摘 要：文章主要对蛋白质的分离纯化的各种原理和方法作了简要的概述，同时简单的介绍了蛋白质结晶的方法及 影响因素。 关键词：蛋白质;分离纯化;结晶 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Q51 A 1006-8937 2009 19-0046-03 Studies on separation and purification crystallization of protein 1 2 3 YAO Zhi-yuan ,ZHOU Hao-peng ,ZHOU Jing-fang （1.Technical CentreofAnimalandPlantQuarantin Heze,Shandong 274000,China;College ofFood Scienc Wuhan,Hubei430070,China) Abstract:In this paper,it summarized the various principles and methods of protein separation and purification,and introduced the methods and factors of protein crystallization at the same time. Keywords ：protein;separation;purification;crystallization 蛋白质的分离纯化是研究蛋白质结构、化学组成和 质分子的亲水性，当水中加入少量盐时，盐离子与水分子 生物功能的基础。蛋白质在自然界中存在于复杂的混合 对蛋白质分子的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解 体系中，而且许多重要的蛋白质在细胞中的含量极低。要 度增大。但盐浓度增加一定程度时，水的活度降低，蛋白 把蛋白质从复杂的体系中分离出来，同时又要防止其组 质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质相 成、结构的改变和生物活性的丧失，显然是有相当难度 互聚集而沉淀析出。 的。 目前蛋白质的分离纯化技术的发展趋向于精细而多 1.1.2 等电点沉淀法 样化技术的综合运用，但基本原理均是以蛋白质的性质 利用蛋白质在等电点时溶解度最低，而各种蛋白质 为依据的。破碎组织细胞，提取蛋白质混合物，利用盐析 又具有不同的等电点来分离蛋白质的方法，称为等电点 法、有机溶剂沉淀法等对蛋白质进行粗提；电泳和色谱技 沉淀法。蛋白质的等电点(pI) 即蛋白质的净电荷为零时的 术则可对粗提蛋白质进行进一步的分离纯化，而且可对 pH 值，由于等电点时的蛋白质净电荷为零，因而失去了 纯化蛋白质进行结晶和制备。实际工作中应按不同的要 水化膜和分子间的相斥作用，疏水性氨基酸残基暴露，蛋 求和条件选用不同的方法。 白质分子相互靠拢、聚集，最后形成沉淀析出。 1.1.3 有机溶剂沉淀法