肝癌细胞与正常肝细胞自体荧光光谱比较研究.pdfVIP

肝癌细胞和正常肝细胞的自体荧光光谱研究 李静，曾红娟，庞小峰 电子科技大学生命科学与技术学院，四川成都（610054 ） Email: orangeljj@ 摘 要：本文采用荧光光谱技术对体外培养的SMMC-7721 肝癌细胞和HL-7702 正常肝细胞 的自体荧光进行了研究。结果表明：两种细胞的自体荧光的发射光谱在波长为 550-720nm 范围内发射峰的数目和峰位均相同(602nm 和691nm) ，只是主峰的波形略有差异。而在波长 为720nm-800nm 范围内，肝癌细胞有一特征荧光峰，峰位置在波长为734nm 附近，而正常 肝细胞则无此峰。通过对多代培养的细胞进行荧光光谱测试，发现两种细胞的荧光光谱特征 在细胞传代的过程中保持不变，说明细胞中的组成物质在细胞传代过程中保持稳定。这两方 面的实验为利用荧光光纤传感器来检测癌症打下了坚实的基础。 关键词：肝癌细胞；正常肝细胞；自体荧光光谱 中图分类号：TN249 1．引言 目前全世界发现有100 多种癌症，身体的任何部位均可能受到侵袭。仅在2005 年我国 就有760 万人死于癌症，占全世界5800 万死亡人数的13%。在所有因癌症死亡者中，有70% 以上发生于低收入和中等收入国家。全世界造成男性死亡5 种最常见癌症(按发生频度排列) 为：肺癌、胃癌、肝癌、结肠直肠癌和食道癌。造成女性死亡 5 种最常见癌症(按发生频度 排列)为：乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠直肠癌和宫颈癌。总的来说，对国内在不同阶段因不 同癌症而导致死亡的死亡率顺序进行调查统计的结果显示，70 年代中的顺序为胃癌、食管 癌、肝癌、肺癌、宫颈癌；90 年代初的顺序为胃癌、肝癌、肺癌、食管癌、结直肠癌；本 世纪初的顺序为：肺癌、食管癌、肝癌、胃癌、结直肠癌。另外对 1991 年-2000 年中国城 市和农村主要癌症发病率进行统计，发现在城市居民中肺癌占首位，其次为肝癌、胃癌、结、 直肠癌，食管癌，这五种癌症合计占癌症死因的 71.25% 。在农村患者中，肝癌居第一位， 其次为肺癌、胃癌、食管癌及结、直肠癌，这五种癌症合计占癌症死因的79.4% 。不管在城 市还是在农村，对全世界范围来说，对那些因癌症而死亡的病人如能及早发现和充分治疗， 其中有 1/3 癌症都是可以治愈的。这里及早发现的一个含义就是要进行早期检查。目前的早 期检查主要是指常规检查。 对于肝癌常用的实验室检查主要包括：1、甲胎蛋白的含量测定；2 、γ谷氨酰转移酶的 含量测定；3、α－L －岩藻糖苷酶的含量测定；4 、B 型超声波； 5 、电子计算机体层摄影、 磁共振以及肝动脉造影等[1] 。这些常规检查，不仅过程非常复杂，费时较长以外，而且还伴 随着一定程度的痛苦。如果我们能提供一种检查过程快捷且经济实惠，检查结果可靠的方法， 这将会更有利于推动常规检查工作的开展。近年来，利用荧光光谱技术来诊断恶性肿瘤已日 渐引起肿瘤专家的关注，由于这种诊断方法具有快速、客观、灵敏、准确、无损伤且简单实 用等特点并可以检测出常规方法难以发现的早期肿瘤的微弱荧光，有希望成为一种新的癌症 诊断方法而引起国内外学者广泛关注，并且在这方面做了大量的研究工作。不过他们的研究 主要集中在肿瘤组织和血清的荧光光谱方面 [2-5]，而采用荧光光谱技术来对体外培养的肝癌 细胞进行研究这方面的报道很少。 本研究的目的就是通过对体外培养的肝癌细胞和正常肝细胞的自体荧光进行研究，找到 这两种细胞自体荧光光谱的特征，为采用荧光光谱技术进行肿瘤研究提供依据。 - 1 - 2 ．实验 2.1 细胞培养 人肝癌细胞SMMC-7721[6]和正常人肝细胞HL-7702[7]，均购自华西医院移植免疫重点实 验室。将两种细胞分别加入含 10% 新生牛血清（GIBCO ）的PMI1640 培养基（Hyclone ） 并置于5%CO2 的培养箱中，37。C 常规培养。 2.2 样品制作 5 将原位杂交专用盖玻片置于六孔培养板中，将细胞按5×