基质金属蛋白酶组织抑制剂-1对髓核细胞影响的初步及研究.pdfVIP

32 安徽省医学会骨科学第十三次学术会议论文汇编 体外培养可获得足够多的种子细胞数量。 细胞免疫学研究表明，每个细胞表面都存在许多抗原，具体的抗原类型与细胞的种类及分化程 虽然可能混杂有其它细胞，但仍然是一类纯系细胞，不是由多种前体细胞组成的细胞群，并且从第1 响，通过体外传代培养可获得大量性质均一的种子细胞；同时细胞周期分析也显示，经过多次传代 后，大多细胞仍处于GO／G1期，符合干细胞特征，具有高分化潜能【3’4】。 CD34是造血干细胞及其祖细胞广泛使用的标志，同时也在血管内皮细胞及其祖细胞中高表达。 胞传代次数的增加，ADSCs表面抗原CD34由阳性转为阴性【11J，说明其他文献报道的ADScs表达cD34 可能系杂质细胞污染所致。本试验中采取12h后用PBS液剧烈洗涤，有效的减少了其他细胞污染的机 会，所以检测到ADSCs的CD34阳性率很低，几乎不表达cD34。 细胞，cD34阴性细胞却不能诱导成为脂肪细胞[121，但本实验中CD34阳性的细胞只有4％左右，却观 察到成脂诱导后大多细胞可分化为脂肪细胞，仅仅由CD34阳性细胞诱导形成是不可能的，造成这种 矛盾的原因是否由于CD34抗体识别的抗原表位不同所致?同样，这是否也是各种文献对ADSCs表面 抗原报道不一致的原因之一? 成骨细胞通过基质小泡释放钙离子和ALP等物质，钙离子在ALP作用下沉积在胶原上，完成基 质矿化过程。ALP是成骨细胞标志性酶之一，其表达表明向成骨细胞分化的开始；另外，分泌钙盐 是成骨细胞的特征之一，von 14d后，进行ALP染色，发现3组细胞胞浆均被染成粉红色或紫红色，呈阳性，同时VonKossa染色发 现典型黑色矿化结节的形成，3组细胞在ALP及VonKossa染色检测指标方面未有显著差异。 到细胞内脂滴大量聚集，油红。染色强阳性，说明3组细胞均已分化为脂肪细胞，无显著差异。 本试验进步证实了脂肪组织可分离培养出ADScs，大多细胞处于静止期，表面抗原cDlO、CDl3、 细胞周期及多向分化潜能无明显影响，通过体外培养可获得大量性质均一的种子细胞。 基质金属蛋白酶组织抑制剂．1对髓核细胞影响的初步研究 王成黄明王皓宇 (蚌埠市第三人民医院骨科) 摘要目的观察不同浓度的TIMP．1干预下的体外髓核细胞蛋白聚糖和II型胶原的表达，初步探讨TIMP．1对椎间 盘退变缓解或逆转的作用。方法 将术中取得的成人髓核标本分离出髓核细胞并培养，以不同浓度的 蛋白聚糖和II型胶原的降解，在40n咖l啪．1下效果最为显著。 安徽省医学会骨科学第十三次学术会议论文汇编 33 关键词椎间盘退变，髓核细胞，细胞培养，基质金属蛋白酶组织抑制剂．1 椎间盘退变性疾病是腰背痛最常见的原因，且目前尚无有效的根治疗法，严重影响了人们的生 活质量。研究表明，髓核细胞的数量减少、活性降低，细胞外基质(主要是蛋白聚糖和II型胶原)含量 减少是椎间盘退变的极其重要的因素【l】。许多研究报道基质金属蛋白酶①m口s)和其抑制物即基质金 属蛋白酶组织抑制剂(Tm口s)的比例失调在椎问盘退变的发展过程中有着举足轻重的地位【2^41。其亚 型之一啪．1因其分子结构特点能结合除14，19以外的几乎所有MMP而使其活性减弱，可与 M^佃．9前体及有活性的MMP．1，．3，．9成高度亲和的，非共价键结合的复合物，从而抑制M^但s 的水解酶活性。但目前对TnvIP．1直接干预体外培养髓核细胞的研究报道甚少，因此作者通过体外 培养人退变髓核细胞，以TⅡⅥP．1进行干预，测定被干预细胞蛋白聚糖和II型胶原的含量，探讨其 对体外培养退变髓核细胞的延缓或逆转作用。 1材料与方法 1．1髓核组织来源收集6例在东南大学附属中大医院行内镜下椎间盘摘除术患者的髓核组织，全部 Ⅳ级1例。 1．2主要试剂DMEM／F12培养基，胎牛血清，Ⅱ型胶原酶，胰蛋白酶，肿．1兔抗人II型胶原多 克隆抗体。 1．3髓核细胞的分离培养椎间盘退变患者手术中取出椎间盘组织，取出髓核组织无菌条件下用含 度为O．2％胶原酶静置消化4h，用200目滤网过滤。用HAM 培养箱中培养，隔2d换液。 别检测II型胶原和蛋白聚糖的表达。 1．5细胞生长形态观察每天用倒置相差显微镜进行动态观察，注意细胞贴壁情况及形态的变化。 浆橙红；⑧中性树脂封片后光镜下观察。 1．7髓核细胞甲苯胺蓝染色①髓