多色微球液相芯片技术的发展及其应用.pdfVIP

两种不同波长的光。通过比较658nm／712nm发射光的比率，能够产生最多100 种不同的荧光微球。通过应用准确的流体技术，数字信号处理器和先进的光学仪 器，使多色微球液相芯片技术具有独有的分析功能。多色微球液相芯片仪能根据 事先确定的荧光发射比率鉴定出每一种微球。通过羧基或者其他基团结合了不同 的分析物质(抗原、抗体、寡核苷酸探针等)的多种微球可以在同一样本中充分 混合，再与结合了第三种荧光染料(绿色荧光染料)的受体分子结合，通过多色 微球液相芯片技术的各种软件就可以定性和定量分析发生在微球表面的各种反 应【lJ。多色微球液相芯片是一种多重数据获取和分析平台，它以微球为基础，能 同时进行至多100种不同的分析。它不仅在捕获和竞争抑制性分析中用于血清蛋 白的定性和定量分析，而且通过结合各种特异性寡核苷酸捕获性探针也可以应用 于核酸的检测分析中。 2．多色微球液相芯片技术在各领域的应用 2．1多色微球液相芯片技术在蛋白质检测方面的应用 2．1．1多色微球液相芯片技术在免疫分析中的应用 多色微球液相芯片技术最早应用在免疫分析中，Martins．TB等学者Ⅲ利用微球 在每个样本中加入真正的内对照，用于检测是否正确的加入了样本和是否含有干 factor 扰性的类风湿因子(rheumatoidRF)。他们在微球上结合了抗人类的山羊 血清中的IgM或IgG抗体，用于检测病人的稀释血清样本中的IgM或IgG，确 定是否正确的加入了样本。通过在特异性的微球上结合人类的IgG，检测病人的 样本中是否有RFs。而且通过在微球上结合抗人类的IgM抗体，检测人类呼吸道 病毒的特异性igM抗体，也能发现潜在的干扰性IgMRFs。Opalka,David等学者【2J 利用多色微球液相芯片技术同时定量检测人乳头瘤状病毒(human HPV)6、11、16、18型特异性的针对类病毒粒子的中和抗原 papillomaviruses 决定部位的抗体，他们在样本中加入结合了酵母源性VLPs的4种不同的荧光微 球，通过检测在血清中有能力置换藻红蛋白标记的、结合在各自的类病毒粒子上 敏感中和抗原决定部位的多克隆抗体的滴度，同时定量HPVs6、11、16、18型 特异性的中性抗体。Biagini．RE等学者口】利用多重荧光共价偶联微球免疫分析检测 了对应炭疽杆菌毒素的人类IgG抗体，通过在样本中加入已结合了抗保护性抗原 factor (protectiveantigenPA)IgG和抗致死性因子(1ethalLF)IgG的微球，分 intensities 光强度(meanfluorescenceMFIs)，从而对病人血清中炭疽杆菌毒素进 行定量分析。Jones．LP等学者利用多色微球液相芯片技术对呼吸系统病毒 Virus RSV)G蛋白两个不同区域的族特异性抗体进行了 Syncytial (Respiratory 多重分析HJ，他们把结合了通过克隆和表达来自不同基因型RSV内部60一172 (91)核苷酸和羧基端193位氨基酸至羧基端(92)不同区域的多肽抗原的微球 加入混合物中，与微球上抗原反应的抗体就能被生物素和荧光标记的分子探针检 测，然后分析比较两种平均荧光强度(MFI)，从而对其做定量和定性的分析。 Wong．SJ等学者运用多色微球液相芯片技术分析检测了人类抗黄病毒抗体15J，他 们把西尼罗河(WN)病毒E蛋白抗原共价结合到聚苯乙烯荧光微球上，之后再 与稀释的血清或脑脊液荚同孵育，与E蛋白抗原结合的抗体再与荧光标记的抗 人类免疫球蛋白抗体结合，然后采用双重激光的Luminexl00分析。通过分析比 较平均荧光强度(MFI)，从而对人类抗黄病毒抗体进行定量定性分析。BuliardA 等学者[6】利用多色微球液相芯片技术检测自身免疫性疾病，通过对与自身免疫性 ribosomal and双链DNA抗体)进行定性和定量分析，从而对系统性自身免疫性 疾病进行临床诊断。 2．1．2多色微球液相芯片技术在可溶性的蛋白分子或化学因子检测中的应用 多色微球液相芯片技术提供了一种高度敏感的多重分析平台，能同时对细 胞因子或化学因子进行定性和定量检测。把每一种捕获性试剂结合到