急性过敏反应检查方法研究进展及在风险评估中的应用探讨.pdfVIP

二、I型超敏反应和类过敏反应体外替代方法研究 and RestrictionofChemicalSubstance)，即《化学品注册、评估、许可和限制》，要求适当使 ion， 用一些体外替代方法以减少动物实验。目前，随着动物福利越来越受重视和3R(reduct 题。 不少研究者开始尝试根据超敏反应发生机制，选取合适的细胞系模拟超敏反应发生过程中 一个或多个关键步骤，根据受试物处理后细胞生物学上的表型和功能变化，定性或定量评价受 试物的潜在致敏性，从而建立超敏反应评价的体外方法。研究较多的是用KU812(人白血病细 价I型超敏反应和／或类过敏反应。 1、KUSl2细胞 KU812是从一个患有脊髓性白血病患者的外周血中获得的前嗜碱性粒细胞，与成熟BASO的 e 一个重要区别是细胞表面的FcRI表达量低或者不表达，研究发现用氢化可的松(HC)和IgE 协同处理KU812细胞使其分化为成熟BASO，用流式细胞术检测表达Fc￡RI的细胞数，结果高 IgE协同处理后，对IgE介导的组胺释放实验更加敏感，因而采用HC和IgE协同处理的 KU812F的分化型细胞建立超敏反应的体外评价方法。用抗原特异性抗血清和抗原处理分化的 KU812F细胞，检测胞内总组胺水平和释放的组胺水平作为评价指标订1。 2、RBL一2H3细胞 RBL一2H3细胞是大鼠嗜碱性白血病细胞株RBL(Ratbasophilicleukemia)的一个亚系， 可通过嗜碱性白血病Wistar大鼠血液中分离的RBL细胞株反复克隆获得，尽管该细胞名为嗜 碱性白血病细胞株，但其实是一种黏膜型肥大细胞，用含抗原特异性抗体的动物血清与RBL一2H3 细胞共孵育，一定时间后再加入该抗原，RBL一2H3细胞脱颗粒释放组胺和B一氨基己糖苷酶，故 以细胞脱颗粒率、组胺释放量和13一氨基己糖苷酶量作为指征。 国内学者阳1用RBL-2H3细胞研究临床上不良反应发生率较高的中药注射剂的致敏性，结果 发现双黄连、柴胡、穿琥宁等注射剂都能显著引起RBL-2H3脱颗粒，不同注射剂作用后B一氨基 己糖苷酶和组胺释放也有不同程度升高。同时该研究者还用RBL-2H3细胞研究了中药注射剂的 类过敏反应，即RBL-2H3细胞直接与中药注射剂共孵育，一定时间后观察细胞脱颗粒情况、检 测B一氨基己糖苷酶和组胺释放情况。将这两种实验结果对比发现，引起致敏RBL-2H3细胞脱颗 粒、动物和临床过敏反应较多的双黄连以及穿琥宁注射液，在类过敏反应实验中这一作用并不 明显，表明双黄连和穿琥宁注射液引起的过敏反应有IgE参与，可能是药物中存在抗原或者半 抗原物质，而非药理活性引发肥大细胞脱颗粒所致的类过敏反应。由此可见，RBL-2H3细胞脱 颗粒方法不仅一定程度上评价了药物的潜在致敏性，还能区分临床上经常混淆的过敏反应和类 过敏反应，在中药注射剂的安全性评价方面具有一定的优越性。 一54— 3、其他方法 I型超敏反应除了应用脱颗粒试验评价外，还有一种BASO活化实验，以超敏反应发生时 BASO活化的表面标志CD63和CD203c作为指标，临床上用流式细胞术检测其表达量，以诊断患 者是否发生了超敏反应。由此推断，若选取合适的嗜碱性粒细胞系，在体外与致敏原孵育，然 后流式细胞术检测CD63和CD203c，这也许可成为I型超敏反应的另一种体外替代评价方法例。 三、过敏反应检查在风险评估中的应用探讨 国家食品药品监督管理局发布的2012年药品不良反应监测年度报告显示，2012年中药注射 剂不良反应报告10．3万例次，其中严重报告5500余例次，占5．3％，比2011年增长58．2％，严 重报告同比增长37．2％。全国药品不良反应监测网络收到的严重报告中，中成药例次数排名前 20位的均为中药注射剂。中药注射剂严重报告例次数排名前10位的品种依次为：清开灵注射 剂、参麦注射剂、双黄连注射剂、血塞通注射剂、丹参注射剂、香丹注射剂、生脉注射剂、血 栓通注射剂、脉络宁注射剂、黄芪注射剂。国家基本药物不良反应／事件报告中，化学药例次数 排名前5位的品种均为抗感染药，分别是左氧氟沙星、头孢曲松、头孢呋辛、青霉素和甲硝 唑。 过敏反应是头孢菌素类和中药注