改良外周血DNA提取方法的效果分析.pdfVIP

l364 GuangxiMedicalJournal，Oct．2011，Vo1．33，No．10 改良外周血 DNA提取方法的效果分析 陈碧艳 覃 茜 李金花 (广西百色市妇幼保健院，百色市 533000) 【摘要】 目的 探讨经济有效提取外周血DNA的方法。方法 对常用外周血DNA提取方法(试剂盒提 供方法)进行改进，比较常用试剂盒方法与改进方法的效果。结果 改进法提取DNA质量及扩增效果均明显 优于常用试剂盒方法。结论 改进法提取外周血 DNA成功率高、质量好、扩增效果更好，并且不增加试剂成 本。 【关键词】 DNA提gz；试剂盒提取方法；改进 【中图分类号】 R446．11 【文献标识码】 A 【文章编号】0253-4304(2011)10．1364-03 随着生命科学的不断发展，临床疾病的研究已经 留管底沉淀。(5)向沉淀中加 800 l无水乙醇，漩 进入分子生物学水平，从全血中提取高浓度、高纯度、 涡振荡器上充分悬浮沉淀，8000r／min离心5s，弃去 高质量的DNA已成为临床关注的首要问题 1-4j。目 上清液。将离心管倒置在吸水纸上片刻，保留管底沉 前我科使用的DNA提取方法是国产试剂盒内提供方 淀。重复步骤5，用无水乙醇多洗 1次。(6)沉淀置 法。为不增加检验成本，提高实验的成功率，我科对 于真空旋转干燥仪中60~C干燥约 10min，当沉淀完 试剂盒方法、步骤等进行改进，本文比较试剂盒方法 全干燥成 白色粉末后加人 100 l溶解液并混匀， 与试剂盒改进法抽提全血基因组 DNA结果，现报告 60℃保温 10min，8000r／min离心5S，上清液即可作 如下。 为PCR模板。(7)用本法提取7个外周血 DNA样 本 。 1 材料与方法 1．2．2 试剂盒外周血DNA提取改进法：(1)在 1．5IIll 1．1 材料 离心管中加入900 裂红液及 100 抗凝全血，充分 混匀，室温放置 10min，13000r／min离心2min，弃去 1．1．1 标本来源：随机选择我院门诊就诊患者 7 例，抽取外周静脉全血 1ml，枸橼酸钠抗凝混匀备用。 上清液，保留管底沉淀。(2)加入 12 变性液 A和 300 充分摇匀的变性液 B，充分混匀，室温放置 1．1．2 试剂：外周血 DNA提取液为国产试剂配送； 琼脂糖；设备：紫外透射仪，珠海医学仪器有限公司生 10min，13000r／rain离心2min，弃去上清液。将离心 产，型号uV-3C；PCR仪：杭州晶格科学仪器有限公 管倒置在吸水纸上片刻，保留管底沉淀。(3)向沉淀 司生产，型号 K960；电泳仪：北京市六一仪器厂生 中加900 洗涤液I，漩涡振荡器上充分悬浮沉淀， 产，型号DYY-6C；离心机：珠海医学仪器有限公司生 13000r／min离心2min，弃去上清液。将离心管倒置在 产，型号 16K；照相机：日本佳能有限公司生产，型号 吸水纸上片刻，保留管底沉淀。(4)向沉淀中加900 G10。 洗涤液Ⅱ，漩涡振荡器上充分悬浮沉淀，13000r／min离 1．2 外周血 DNA提取方法 心2min，弃去上清液。将离心管倒置在吸水纸上片 1．2．1 试剂盒外周血DNA提取法：(1)在 1．5m1离 刻，保留管底沉淀。(5)向沉淀中加900Ixl无水乙 心管中