哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路抑制对小鼠胚胎早期发育影响.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集 ml !!!!!!!!!!皇曼暑!!!!!曼!詈j————————I!!!!!苎皇!!!鼍! 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路抑制对小鼠胚胎早期发育的影响 张宇，周娜汝，周亮，张喜风，吴蓉花，张运海 (安徽农业大学动物科技学院，合肥230036) 引言 雷帕霉素是一种大环内酯类免疫抑制药物，能够特异性抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 基端的FRB结构域形成三元复合物，使得mTOR的激酶催化域失去接近并磷酸化下游靶蛋 白的能力，从而抑制roTOR的生物学功能。有研究表明敲除roTOR基冈的小鼠胚胎在着床 后会很快死亡【l】，但是在胚胎的早期发育过程中mTOR的作用尚不清楚。本试验初步探讨雷 帕霉素处理小鼠体外受精胚胎后，对卵裂以及囊胚形成的影响。 材料与方法 以原核期、二细胞期小鼠体外受精胚胎起始培养，分别包括100pg／mL雷帕霉素处理组、 对照组。完全胚胎培养液为化学限定型f2】，胚胎的发育质量通过囊胚差异染色的结果进行评 价。 结果 将原核期受精胚胎置于各处理组的培养液中，培养至24h后发现，卵裂率未受到影响。 而培养至90--X)6h后发现，雷帕霉素能抑制囊胚的形成，且该作用具有浓度依赖性。当雷帕 霉素浓度达到100ng／mL时，囊胚形成率与对照组相比明显降低(P0．05)。将原核期受精胚 胎置于不添加雷帕霉素的培养液中，培养至24h后，挑选正常卵裂的胚胎在各处理组培养液 中继续培养；培养至9ff--96h后发现，当雷帕霉素浓度达到lOOng／mL时，依然会对囊胚的形 成有显著抑制作用。将获得的各组囊胚进行差异染色，发现lOOng／mL处理组内囊胚的内细 胞团、外滋养层的细胞数以及总细胞数均发生显著下降。 讨论 用于体外受精的卵母细胞在小鼠体内成熟过程中已经积累了一定量的周期蛋白B(cyclin B)与其它各种营养组分，同时，较之以往的研究。处理组雷帕霉素的剂量要低很多，所以未 表现出对小鼠胚胎的卵裂行为有显著的影响。而继续在添加有雷帕霉素的培养液中培养胚胎， 无论是从原核期还是从正常培养至二细胞期后开始，小鼠胚胎的囊胚形成，在lOOne∥mL处 理组都表现出显著被抑制，并且相较于对照组，处理组囊胚的内细胞团、外滋养层细胞数以 B 及总细胞数也开始减少。雷帕霉素的存在抑制了roTOR行使正常的生理功能，造成cyclin 的周期性合成受阻而影响到细胞周期的正常运转。这些都说明mTOR信号通路对于胚胎细胞 增殖和早期胚胎的正常发育是必需的，甚至由此对出生后生长都发挥着重要作用。 参考文献 et themousemTORleadsto Mueller of YG M，DannSQ a1．Disruption gene early 【1]Gangloff and stemcell Cell Biol，2004， lethalityprohibitsembryonicdevelopment[J]．Mol postimplantation 16． 24(21)：9508—95 ofthemouse a1．Differential GT,LawittsJA，PapaioannouVE，et growth preimplantation [2]Erbach in defined media[J]．BiolReprod．1994，50(5)：