转植酸酶基因玉米的获得及其后代的初步鉴定.pdfVIP

维普资讯 玉 米 科 学 2008，16(1)：15～19 JournalofMaizeSciences 文章编号：1005—0906(2008)01—0015—05 转植酸酶基因玉米的获得及其后代的初步鉴定 刘欣芳 ，高晓蓉 ，苏 乔 ，安利佳 ，李月明 f1．辽宁省农业科学院玉米研究所，沈阳 116016；2．大连理工大学环境与生命学院，辽宁 大连 116023) 摘 要：构建了仅含有启动子序列 、植酸酶基因和终止子序列的线性基因转化元件 (UPN)及其两端分别带有 T—DNA边界序列(rI’一UPN)~[1--段载体序列 一UPN)的不同线性转化元件 ，不含选择性标记基因和载体骨架序列，采用 花粉管通道法对选定的玉米 自交系进行转化 ，对 728株T1代转化玉米 PCR检测。结果表明，UPN、T—UPN、V—UPN3 个转化元件的阳性率分别为0．44％、2．2％和 1．8％，平均转化率为 1．5％。检测时，以种子在果穗上的不同位置分别播 种、检测。结果表明，PCR阳性株都是来源于第5—9圈的种子，这个部位的阳性率达到 3．57％，说明花粉管通道法转 化玉米的成功率与种子结实的位置有关。植酸酶 比活结果说明外源基因在转化玉米植株内实现了蛋 白质水平的表 达 。 关键词：花粉管通道法；玉米 ；植酸酶；线性化基因；遗传转化 中图分类号：S513．035_3 文献标识码：A TransconductphyA IlGeneintoMaizeInbredLinesandthe ElementaryAppriseofTransgenicProgency LIUXin-fang，GAOXiao-ronga，SUQiao，ANLi-jia，LIYue—ming (1．CornResearchInstituteofLiaoningAcademiyofAgriculturalScience，Shenyang110161； 2．EnvironmentandLifeSchoolofDalina UniversityofTechnology,DaLina 116023，China) Abstract：ThreelinearizedDNAfragmentswithoutselectablemarkergeneandvectorbackbonewereconstructed containingphyAgenewithregulationsequences(UPN)orT—DNAborders(T—UPN)ortheplasmidb0rders(V—UPN)． Thelinearizedgeneswithoutselectablemarkerandvectorbackbonearesafeinbiology，theyweretransformedinto maizeinbredlinesrespectivelyviapollen—tubepathway．PCR amplificationforthreetransformantsT1seedsshowed differentpositiverate．UPN was0．44％。T-UPNwas2．2％ andV-UPNwas1．8％．Theresultsalsoshowedthatthera- ti0ofsuccessfultransformantbypollen-tubepathwaywasrelatedtothelocationofseedsandthetimeafterpollination butnottothelinesofmaize．TheresultsofphytaseactivityassaysdemonstratedthatthephyA IIgenehasbeenex— pressedatproteinlevelsinthetransgenicmaize． Keywords：Pollen——tubepathwa