转铁蛋白偶联双氢青蒿素氧基苯甲酰肼的载药量分析.pdfVIP

维普资讯 第 36卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 第 7期 2008年 7月 ChineseJournalofAnalyticalChemist~ 983—986 转铁蛋白偶联双氢青蒿素氧基苯 甲酰肼的载药量分析 黄连喜 曾鑫 蔡怀鸿 杨培慧 (暨南大学化学系，广州 510632) 摘 要 在含20％乙醇的B—R缓冲溶液(V／V，pH=7．2)中，利用电分析化学方法测得双氢青蒿素氧基苯 甲 酰肼 (dihydr0artemisinin0xybenzoicacidhydrazide，DBAH)在银电极上于一0．66V(YS．SCE)处有一不可逆还原 峰。DBAH与被高碘酸钠氧化后的转铁蛋 白(holotransferrin，Tf)结合形成电活性复合物，其还原峰峰电位 由 一 0．16V负移至一0．84V，峰电流随 DBAH和 rrf浓度的增加而增加。该法测得一个 Tf分子可 以与 3个 DBAH分子连接，其结合常数为5．1×10 。紫外可见吸收光谱法测定结果与电化学测定结果相吻合。实验 结果表明，rrf与DBAH共价结合形成电活性复合物。 关键词 双氢青蒿素氧基苯甲酰肼，转铁蛋 白，电分析化学，载药量 1 引 言 双氢青蒿素 (dihydroartemisinin，DHA)是一种具有过氧基团的新型倍半萜内酯 ，由青蒿素 (QHS)还 原生成，有抗疟抗肿瘤活性，其过氧键是产生药理作用的关键部位…，而铁对青蒿素类药物的抗疟抗肿 瘤活性起着重要作用 。关于青蒿素类药物的电化学研究已有报道 ，有文献提出了血红素对 QHS过氧 键的电催化还原作用 以及谷胱甘肽、表面活性剂共存体系对 QHS过氧键稳定性的影响 。转铁蛋 白 是一种参与铁运输与代谢的单肽链糖基化蛋 白，分子量70—80kDa 。由于恶性肿瘤细胞对铁的需求 比正常细胞大得多，肿瘤细胞通过表面过度表达 Tf受体来获得大量铁用于 自身增殖。近年来，利用 rrf 与Tf受体特异性结合进行药物的靶向传输备受关注。Henry等 将双氢青蒿素的一种衍生物与Tf共 价连接制备靶向药物，通过 Tf受体的介导作用显著提高药物对人淋巴肿瘤细胞的杀伤作用，并采用 MALDI．MS对 Tf结合该衍生物的量进行测定。由于rrf携带药物量是对靶向药物评价的重要参数，本研 究把已制备的一种新的衍生物双氢青蒿素氧基苯 甲酰肼 (DBAH)与经氧化的Tf偶联，形成靶 向药物 ， 采用简便快速的电分析化学方法对 Tf载带的药物量进行测定。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 CHI660A电化学工作站(美 国CHI公司)；UV1901紫外分光光度计 (北京瑞利公司)；石英亚沸高 纯水蒸馏器 STZ—B(江苏富华仪器有限公司)。 DHA(重庆彼迪药业有限公司，纯度 98．8％)；Tf(分析纯，Sigma公司)；B．R缓冲溶液 (pH6．8)， 配制方法参照文献[7]；其余试剂均为分析纯；实验用水均为二次亚沸蒸馏水。 2．2 实验方法 2．2．1 DBAH的制备 以DHA为原料，合成末端氨基化的DBAH。(1)DHA与乙酸酐反应生成乙酰 双氢青蒿素；(2)乙酰双氢青蒿素与对羟基苯 甲酸 甲酯反应制得所需中间产物双氢青蒿素氧基苯 甲酸 甲酯；(3)将双氢青蒿素氧基苯 甲酸 甲酯与水合肼反应，生成最终产物DBAH，所得产物过硅胶柱层析分 离纯化。各阶段反应产物均通过红外光谱、氢谱、碳谱、质谱进行结构鉴定，获取 目标产物DBAH。 2．2．2 Tf的氧化 利用高碘酸钠氧化法，将Tf的邻位羟基氧化成末端醛基，粗产物用葡聚糖G-25柱 层析脱盐，得到的馏分在超滤管 中浓缩，定容 ，得 1．0×10 moL／L溶液。 2．2．3 电化学测定 在含20％乙醇的B—R缓冲溶液(pH7．2)中，分别加入一定浓度的DBAH、氧化 Tf 2007~9-06收稿；2007—12-29接受 本文系广东省 自然科学基金(No．021190)和广州市科技计划 (No．2003Z3D2041)资助项 目 E—mail：typh@ inu．edu．cn