转基因玉米根际土壤DNA的提取.pdfVIP

维普资讯 安徽农业科学，Journal Anhuiagn．Sci．2008，36(15)：6192—6193 责任编辑 孙红忠 责任校对 卢瑶 转基因玉米根际土壤 DNA的提取 许提森 (德州学院生物系，山东德州253023) 摘要 [目的]探索转基 因玉米根际土壤 DNA提取的方法。[方法]采用直接裂解方式，通过玻璃珠、溶菌酶和 SDS共 同作用fi-tO基因玉 米 MON863和Bt176的根际土壤 中，提取微生物 DNA。[结果]该方法能从两种转基 因玉米根际土壤 中提取到20kb的完整 DNA片段。 [结论]所得 DNA完全适用于 PCR扩增和酶切的要求。 关键词 转基因玉米；根际土壤微生物；限制性 内切核酸酶 中图分类号 S151．9 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2oo8)15—06192—02 StudyonDNA l~ dctionMethodinRhizosphereSoilGrownwith 摊1s icCorn XUTi-sen (DepartmentofBiology，DezhouUniversity，Dezhou，Shandong253023) Abstract 强eIesearchaimedtoscre朗 akindofextractionmethodforgenomieDNA inrhizospheresoilgrownwithtrmlsgen／eeom ．Adirectlysismanner forextractingDNAdimenvfromrhizospheresoiloftransgenieeom-．MON863andBt176wasdesignedwiht glassbead-lysozyme—SDSmehtod．Theresults showedhtatnitactDNA fxagmentsover20kbweregainde from rhizosphereosilplantde wiht twoetdtivarsoftransgeniecom．DNA extractedsuitde toPCR amplificationnadRFLP． Keywords Transgeniecorn；Rlfizosphereosilmicroorgnaism；RFLP 在植物根际土壤中存在大量的微生物，其数量远高于非 清液[ ]。在上清液中加入等体积的氯仿／异戊醇 (24：l， 根际土壤 ，在土壤 的生物化学过程 中发挥着重要作用，影响 )，颠倒混匀，放置 10min，10000r／rain、15℃离心 15min， 着植物的生长发育[。植物根际土壤微生物研究一直倍受 收集上清液。加入 2／3倍体积的异丙醇，一20℃沉淀 2h， 关注，尤其随着分子生物学的发展 ，一些不依赖培养 的土壤 10000I／rnin、15cc离心 15min，弃上清液。沉淀用 70％乙醇 微生物学研究方法的出现，突破了传统依赖于培养的研究方 洗 1次，冷冻干燥后溶于30 TEbuffer中，将 同一土壤样品 法的局限，深入了土壤微生物区系、功能、动态的研究。高质 提取的DNA合并在 1个离心管中，一20℃保存。采用 DNA 量的DNA提取是应用这些研究手段的前提，尤其是如何减 试剂盒纯化。 少这些物质对 DNA的污染，降低其对 PCR扩增的干扰变得 1．3 DNA的定量和纯度检测 用 biophotometerDNA定量仪 尤为重要_2 J。笔者尝试采用简便的方法采集转基 因玉米 测定DNA含量，以∞260／OD瑚比值评价纯度。 根际土壤，应用直接裂解方式从其中提取满足核酸分析的微 1．4 PCR扩增反应 扩增采用细菌 16SrDNA通用引物 BSF 生物DNA，为应用分子生物学方法研究转基因玉米根际土壤 和BSR。PCR体系(25 )