壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TβRⅠ／ⅡmRNA表达的影响.pdfVIP

维普资讯 维普资讯 | 实验研|乡苔 。 一 } 。 l尊 誊鞭 1．2 主要仪 器 7000定量 PCR仪 (美 国 ABI公司)．DU一640 (0．05~ L)1．8L，下游 弓I物 (0．05Ixg／IxL)1．8L，SYBR green 型紫外分光光度计 、3K一20型低温高速离心机 (美 国Beckman PCR mix 10L，加无菌水至 201*L。反应条件 ：先在 95℃预变 公司)．全 自动凝胶 电泳图像分析系统 (amersham phemacia 性 5min．然后于 95℃变性 30s．再于 55℃退火 30s．接着于 biotech公司)．液氮罐 、离心机 、电子天平 、水平 电泳槽 (北京六 72℃延伸 30s，共 40个循环 ，72℃后延伸5min。反应结束后 ，琼 一 仪 器 厂 1．P2002精 密 天 平 (上 海 精 密 仪 器 公 司 )， 脂 糖凝 胶 电泳 分析 扩增结 果 ．ABIPrism 7000SDSsoftware MIAS2000型计算机图像分析系统 分析结果 引物序列 (由北京赛百盛生物科技公司合成)：13一 2 实验 方法 aetin：上游 5’一GAGACCTrrCAACACCCCAGCC一3’，下游 5’一 2．1 模 型制作及标本采集 健康清洁级 Wistar大 鼠 104只 AATGTCACGCACGA IrrCCC一3’，长度 263bp；T31RI：上游 5’ (广西中医学 院实验动物 中心提供)，体重 220250g，雌雄各 — ATACAAGGGAGTCAAGITr一3’． F拼 5’— AGATAGGTCAT 半 随机取 16只作为正常对 照组 (A组)给予正常饲养 ．其他 GGCTAA-3’，长 度 239bp；T31RII：上游 5’一GAGTGAAGCCG 大 鼠参照韩德五等2[1CC1复合因素造模方法 (高脂低蛋 白食物 TGGTAGGT一3’．下游 5’一TGAGAAGCCGCAGGAAGT 一3’．长 配合 10％酒精为唯一饮料)进行肝纤维化造模 于第 4周末造 度 107bp 模结束时随机处死 8只大 鼠以证实 中度肝纤维化形成 剩余 2．5 统计方法 各组数据均 以 (±s)表示 ．统计推 断采用 造模大 鼠80只 ．随机分为病理模 型组 (B组)、壮肝逐瘀煎颗 SPSS l1．0软件进行 ．采用秩和检验 ．方差分析法进行检验 ．以 粒剂大剂量组 (C组)、壮肝逐瘀煎颗粒剂小剂量组 (D组)、秋 P0．05为显著性检验界 限 水仙碱对照组(E组)、大黄鹰虫丸对照组 (F组 )共 5个组 ．每 3 实验结果 组 16只。各组大 鼠于造模结束后即灌 胃给药 ：B组灌 胃与治 3．1 各组大鼠肝纤维化程度 比较 光镜下观察 ．A组大 鼠肝 疗组药物同体积 的生理盐水 ，C组灌 胃壮肝逐瘀煎 lg／100g．D 小 叶结构完整清晰 ．呈条索状 向四周放射状排列 B组多数正 组灌 胃壮肝逐瘀煎0．25g／100g，E组灌 胃秋水仙碱 lOixg／lOOg． 常小 叶结构破坏或消失 ，粗大胶原纤维分割 、包绕肝小叶．肝 F组灌 胃大黄廑虫丸0．15g／100g，均为每 日1次 除A组外 ．其 细胞索排列紊乱 ．肝细胞水肿 明显 ，脂肪变性广泛 ．部分有坏 余 各组大 鼠于用药 开始后 每周按 3mg,／kg注射 1次 40％ 死 ，纤维隔 内大量炎细胞浸润。与B组 比较 ．各治疗组大鼠肝 CC1。6