上气道咳嗽综合征(UACS)大鼠模型的建立与评价.pdfVIP

上气道咳嗽综合征(UACS)大鼠模型 的建立与评价 曹治山1，史锁芳2 1南京中医药大学江苏南京210029； 2南京中医药大学第一附属医院江苏，南京，210046 摘要 目的 建立一种大鼠上气道咳嗽综合征的模型并评价其效果。方法清洁级健康雄性 SD大鼠20只，随机分为对照组和模型组，用膨胀海绵填塞大鼠一侧鼻腔，持续4周后，将 模型组大鼠置于自制风箱内，给予香烟雾化，连续20天，建立模型；对照组，自由活动为 主。结果模型组长时间鼻窦部引流不畅及烟雾刺激后出现频繁抓鼻，喷嚏，发作性咳嗽， 清喉，咯痰样，易激惹，饮水量明显增多，精神亢奋，食量减少，活动明显增加或烦躁不安等 上气道咳嗽综合征的表现。血清中炎性介质Ⅲ．8、TNF-a水平明显升高。鼻窦部及咽后壁病 理切片见可见大量炎细胞浸润。结论经探索建立的上气道咳嗽综合征模型其发病机理与临 床相似，这种成功设计的制模方法有一定的推广价值。 关键词上气道咳嗽综合征；大鼠；动物模型；改良 基于己发表文献中的造模方法均为单一的鼻窦炎模型或咽喉炎模型，本次实验结合国内 外文献报道，选择国内常用的SD大鼠，在传统模型制作方法基础上进行适当改良摸索出一 种新的上气道咳嗽综合征模型建立方法，现报告如下。 l材料和方法 1．1实验动物 清洁级健康雄性SD大鼠20只，由南通大学实验动物中心提供(实验动物生产许可证 号：SCXK(苏)2008．0010)。将大鼠按体重采用随机区组法分为2组，每组IO只。分别为： (1)对照组(170．81i-6．17)g；(2)模型组(170．65士5．44)g；具有可比性。 1．2材料与仪器 (1)材料：膨胀海绵：由惠州华扬医疗器械有限公司生产。批号红梅香 烟：由红塔烟草(集团)有限公司生产，烟气烟碱量：0．9rag，焦油量：llmg，烟气一氧 化碳：12mg。自制风箱大小约40x50x60cm。大鼠IL-8试剂盒，美国RB公司生产，编号： BPE30583，批号N：大鼠TNF．a试剂盒，美国RB公司生产，编号： BPE30635，批号v。 (2)主要仪器：莱卡切片机(德国Leica公司，型号：RM2128)；荧光显微镜(日本制造， OLYMPUS型号：BX51)：照相机(日本制造，型号：OLYMPUSC．35AD．2)等。 L3造模方法 采用膨胀海绵鼻腔填塞(鼻窦炎)联合香烟雾化(增加气道炎症)的方法[I-21。先将大 mmx5 鼠腹腔注射麻醉后取膨胀明胶海绵片(3 nlm)置入大鼠左侧鼻腔，距离前鼻孔约15 nlm，位于窦口鼻道复合体处。后用Iml注射器抽取0．5ml金黄色葡萄球菌悬浊液缓慢小心注 入左侧鼻腔内，海绵滞留4周后，模型组大鼠，每天被动吸烟2h，连续20天。具体方法为： 每天上午、下午将大鼠置于自制的风箱内，每次同时点燃3支香烟，持续约20min后，再点 燃3支香烟，共自然燃烧9支香烟。6h后重复第2次吸烟。对照组以自由活动为主。采取记分 法记录抓鼻、咳嗽、喷嚏、咯痰样次数评估鼻窦及咽喉不适程度。方法如下：(1)抓鼻、喷 538 嚏：轻度抓鼻1分；频繁抓鼻2分；抓鼻不止3分。(2)咳嗽：2个以内1分，35个2分；5个以 上3分。(3)清喉：轻度咯痰样1分；中度咯痰样2分；咯痰样不止3分。自香烟雾化结束后开 始观察30分钟，采用叠加法记分，总分超过5分视为动物造模成功。 待出现症状后，随机从正常组和模型组各取2只作病理切片，模型组较正常组鼻窦组织黏 膜明显充血水肿、鼻窦、咽喉大量的炎性细胞浸润等典型的鼻窦部病变及上气道炎症，视为 造模成功。 1．4一般状况观测 观察实验期间各组大鼠的呼吸频率、精神、饮食、活动、毛发、大小便等。 1．5标本采集与观测 1．5．1大鼠血样采集：常规方法采血后用于血清各指标的检测。 1．5．2鼻窦部标本采集：大鼠麻醉处死后，完整切取头部：部分直接取鼻窦部标本冻存；部 分用中性甲醛固定，取鼻窦部标本石蜡包埋，行HE染色。 1．5．3咽喉壁标本采集：大鼠麻醉处死后，沿着大鼠舌根部位，依据解剖位置固定咽喉部 位，完整切取咽喉壁组织：用中性甲醛固定，取咽喉壁标本石蜡包埋，行HE染色。 1．6统计学处理