脂多糖诱导大鼠主动脉内皮细胞的表达血管性血友病因子裂解酶及研究.pdfVIP

脂多糖诱导大鼠主动脉内皮细胞的表达血管性血友病因子裂解酶及研究.pdf

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·论著· 脂多糖诱导大鼠主动脉内皮细胞表达血管性血友病因子裂解酶的研究 郑贵军 殷冬梅 武子霞 孙茜 朱海云 李银平 【摘要】 目的 从剂量-效应和时间-效应关系探讨脂多糖(LPS)对大鼠主动脉内皮细 胞(RAECs)血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13) mRNA 和蛋白表达的影响。方法 采用组 织贴块法培养 Wistar 大鼠的 RAECs,1 周后按1∶3 传代至第4~5 代,将细胞分为空白对照 组和 0.01、0.1、1、5 μg/ml LPS 刺激组,分别于 12、24、48、72 h 用半定量逆转录-聚合 酶链反应(RT-PCR)测定内皮细胞 ADAMTS-13 mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测 上清液内 ADAMTS-13 蛋白水平。结果 空白对照组有一定量的 ADAMTS-13 mRNA 和蛋白表达。 随着 LPS 刺激浓度增加和刺激时间延长,ADAMTS-13 mRNA 和蛋白表达逐渐下降。与空白对照 组(25.22±1.41)比较,0.01 μg/ml LPS 刺激48 h 时ADAMTS-13 mRNA 表达(18.78±0.86) 即明显下降(P<0.01);0.1 μg/ml和1 μg/ml LPS 刺激24 h时 ADAMTS-13 mRNA 表达(23.43 ±0.63、22.41±0.76)即明显下降(P0.05和 P0.01); 5 μg/ml LPS 刺激12 h 时 ADAMTS-13 mRNA 表达(20.01±2.47)即明显下降(P<0.01)。与空白对照组〔(115.76±2.36) ng/ml〕 比较,0.01 μg/ml LPS刺激 12 h 时ADAMTS-13 蛋白表达〔(113.43±1.07) ng/ml〕即明显 下降(P0.05);至5 μg/ml LPS 刺激 72 h 时 ADAMTS-13 蛋白表达〔(7.63±2.64) ng/ml〕 降至最低(P0.01)。结论 RAECs 有一定量的 ADAMTS-13 mRNA和蛋白表达;不同浓度 LPS 刺 激内皮细胞不同时间后 ADAMTS-13 mRNA 和蛋白表达降低,具有剂量依赖性和时间依赖性。 【关键词】 脂多糖;主动脉内皮细胞;血管性血友病因子裂解酶;大鼠 expression of von Willebrand factor cleaving protease of rat aortic endothelial cell by lipopolysaccharide challenge ZHENG Gui-jun, YIN Dong-mei, WU Zi-xia, SUN Qian, ZHU Hai-yun, LI Yin-ping. Department of Intentive Care Unit, Zhuozhou City Hospital of Hebei Province, Zhuozhou 072750, Hebei, China Corresponding author: LI Yin-ping, Tianjin Tianhe Hospital, Tianjin 300050, China, Email:cccm@ 【Abstract】Objective To investigate the dose-response effect and time-response effect of lipopolysaccharide on von Willebrand factor cleaving protease (ADAMTS-13, vWF-cp ) mRNA expression and protein in rat aortic endothelial cells (RAECs).Methods RAECs were grown by culturing of aortic tissue. When ARECs were cultured for one week, it was co-cultured by 1∶3 to reach 45 generations. ARECs were randomly divided into five groups: control group and four LPS stimulation groups (0.01, 0.1, 1 and 5 μg

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