转pGH基因猪阳性鉴定及外源基因在染色体上定位及研究.pdfVIP

l 2012，VOLUMEl3，NOANIMALBIOTECHNOLOGYBULLETIN 7 转-pGH基因猪阳性鉴定及外源基因在染色体上定位的研究 蒋亚军，吴明明，曹月胜，刘剑飞，孙静．迟晓瑶，孙金海’ (青岛农业大学动物科技学院，青岛266109) 引言 为探讨睾丸注射法制各转基因猪的高效性，本试验应用PCR检测、Soutllem印迹杂 交、荧光定量PCR分析等技术，检测通过睾丸注射法制各的第一代转pGH基因猪阳性率。 利用FISH杂交技术研究外源基因在染色体上的具体整合情况，对比外源基因在不同个体 基因组中的整合位点与数目，为转基因动物的定向培育及研究杂交数目与日增重相互关 系提供依据。 材料方法 从青岛农业大学实习基地采集56头转基因仔猪进行PCR扩增及测序，再对PcR测序 后的阳性个体进行Southern杂交，然后采用PCR定量分析法对16头阳性个体与16头同龄非 转基因猪进行试验：最后采用FIStI杂交技术分析6头转基因猪与2头非转基因猪。 结果 睾丸注射法制各的第一代转基因猪通过PCR扩增测序及SoutIlem杂交获得转基因阳性 率为5417％；荧光PCR定量检测结果显示：转基因猪pGH的mRNA表达量是非转基因猪 的1．17倍；转基因猪杂交信号在不同猪号及不同染色体上有差异(图A，B所示)．但主 要分布在l、6、8、13号染色体上；同窝转基因猪平均日增重与杂交信号数成正比，同窝 转基因猪生长速度明显快于非转基因猪；随着转基因猪染色体上杂交信号数越多，其平 均日增重值具有不断增大的趋势。 图A 吲B 讨论 通过PCR、So．hem杂交及荧光定量PCR分析等三种检测技术证明了通过睾丸注射法 制各转基因猪不但方法简单，而且阳性率较其它转基因技术提高了几十倍。其高效的转 基因效率在转基因动物的研究工作中取得了突破性的进展，也为培育节粮瘦肉型转基因 猪新品种提供了资料。另外通过FISH杂交技术进一步证明了外源基因已整合于染色体 上，而且髓着转pGH基因猪染色体上杂交信号数的增多，其平均日增重具有不断增大的 趋势，此为研究转基因猪的生理生化指标、育种以及定向整合等提供了科学依据。 TimePCR；FISH 关键词：睾丸注射法：Southem；Real 2011ZX0800一)03)和 致埘：本研究由转基因生物新品种培育重大专项课题研究计划(No 山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队建设项目资助。 十通讯作者