RNA原位杂交技术及其在植物基因表达研究中的应用.pdfVIP

维普资讯 盘汉擅物学研究 2000，18(1)：57~63 ’ —’ —～ l，删，’ D，H．山 BoatnicalResearch RNA原位杂交技术及其在植物 基因表达研究中的应用． 陈绍荣 杨弘远 (武汉大学生命科学一学院发～育生物●学，_珊—究——中●～心 武汉 430C72) ’ IN JuRNAHYBRlDIzATIoNTECHNIQUE AND IrS APPLICATIoN To STUDIES oF GENE EXPRESSIoN IN PLANTS ChenShaorong yangHongyuan (ReseaecACester如rDevetopmentalBioto~ ，Collegeof Sde,~：es- _ 咖 W ahin 4．$00721 关蕾调墨巡 堡茎t靼，氅 植 Keywords InsituRNA hybridization，G ile。Temporalandspatialexpression 原位杂交 situHybridization)是一种在细胞水平上研究基 目表述谭控的最直接青蛙的分子 生恸 学技术。这一技术最初应用于动物染色体上的基因物理定位 “和特定 mRNK在组织中的空 问定控∞， 后来又作为诊断工具捡畏l婚染病毒的细胞 到 80年代后期，原位杂交技术开始应用于植街蓦匿表达 调控的研究 “一 。 植物基因的时空表达研究是探讨植物生长发育机制的重要手段。由于 RNA原位杂交技术睫母精 确确定基 因表达的时空分布 ，而得到了越来越广泛的应甩l从营养器官生长发育。叫 、生殖器官生长发 育。… 、白交不亲和性 “、胚胎发生 到种子和果实发育。 ”诸方面均有涉足。最近 ，’我们l通过对 RNA原位杂交技术的优化 ”，在研究植物有性生殖、胚胎发生和光合器官发育等过程中的基 旨时空表 达方面获得 了若干有意义的结果 。笔者拟从 RNA原位杂交技术的基本原理 、撩作澎程、应用范围 以及应用前景作一简要介绍和计论 1 RNA．原位杂交 的基丰原理 原位杂交技术是从 Southern和 Northern杂交技术衍生而来 的，可以分为染色体原位杂交和 RNA 原位杂交。染色体原位杂交是Hj标记的 DNA 或寡核苷酸等探针来确定 目标基因在染色体上的位置 (不 在本文讨论)。RNA原位杂交是用同位素 (如。H 3sS和 P等)或非同位素[如地高辛(DIG)和生物素 (BIO)等]标记的双链 DNA或单链反 义RNA探 针 ，对组 织切片或装 片的不 同细 晦中基因表达 产物 mRNA(或 rRNA哪：)进行原位定盥 分布于细咆中的 mRNA与反殳RNA探甘 互补而杂交产生双链的 收稿 日：1998—1118，修 回日第一作者 ：男．1955年 11月出生 ．剐教授 ．博士．从事植物发育生物 学与分子生物学研究 ·国家 白拣科学基垒重点项 目资助课题 (批准号。 维普资讯 58 武 祝 植 物 学 研 究 第 18卷 RNA。标记在反义链上 的 同位 素经放射 自显影 ；非 同位 素经 酶促 免疫 显色或 免痤荧光反应而显示 mRNA在植物组织细胞中的分布位置 。 标记的有义RNA作探针 ，因与细胞内的mRNA不互补丽不能 杂交 ，可以作为对照。植物 生 陡发 育过程 中的基 因表达 有时空顺序差异。特异表达基 因的转录产物 mRNA，会在植物器官的特 定发育时期和特定组织中检测到 ；